| 中文摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 缩略语 | 第8-9页 |
| 1. 前言 | 第9-17页 |
| 1.1 古菌概述 | 第9-10页 |
| 1.1.1 古菌的发现 | 第9-10页 |
| 1.1.2 Sulfolobus tokodaii strain7 | 第10页 |
| 1.2 古菌DNA复制概述 | 第10-11页 |
| 1.3 增殖细胞核抗原(PCNA)概述 | 第11-14页 |
| 1.3.1 PCNA的结构 | 第11-12页 |
| 1.3.2 PCNA的生化性质 | 第12-14页 |
| 1.4 蛋白激酶 | 第14-15页 |
| 1.5 DNA聚合酶 | 第15-16页 |
| 1.6 本研究的意义、内容及目标 | 第16-17页 |
| 1.6.1 本研究的背景和意义 | 第16页 |
| 1.6.2 本研究的内容和目标 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-27页 |
| 2.1 材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第17页 |
| 2.1.2 酶、试剂和试剂盒 | 第17页 |
| 2.1.3 培养基及抗生素 | 第17-19页 |
| 2.1.4 供试质粒 | 第19页 |
| 2.1.5 PCR引物及DNA底物 | 第19-20页 |
| 2.1.6 缓冲液及试剂的配置 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 PCR扩增反应 | 第21-22页 |
| 2.2.2 分子生物学基本操作方法 | 第22页 |
| 2.2.3 蛋白的表达纯化 | 第22页 |
| 2.2.4 蛋白浓度的测定 | 第22页 |
| 2.2.5 互作蛋白的细菌双杂交实验 | 第22-23页 |
| 2.2.6 Pull-down/Western blot | 第23-24页 |
| 2.2.7 激酶体外磷酸化实验 | 第24-25页 |
| 2.2.8 PCNA体内磷酸化探测实验 | 第25页 |
| 2.2.9 DNA底物的同位素标记 | 第25-26页 |
| 2.2.10 DNA聚合酶活性的丙烯酰胺尿素变性凝胶电泳检测 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-41页 |
| 3.1 极端嗜热古菌PCNA与蛋白激酶ST0686的相互作用 | 第27-34页 |
| 3.1.1 相关基因的克隆 | 第27-29页 |
| 3.1.2 蛋白质的表达纯化 | 第29页 |
| 3.1.3 细菌双杂交鉴定ST0686与PCNA的相互作用 | 第29-31页 |
| 3.1.4 Pull-down/Western blot鉴定ST0686与PCNA相互作用 | 第31-34页 |
| 3.2 ST0686对PCNA的体外磷酸化 | 第34-36页 |
| 3.3 PCNA的体内磷酸化探测 | 第36页 |
| 3.4 细菌双杂交实验鉴定StPolB1与PCNA的相互作用 | 第36-38页 |
| 3.5 PCNA对StPolB1对DNA底物聚合活性的影响 | 第38-39页 |
| 3.6 PCNA被磷酸化修饰后对StPolB1对DNA底物聚合活性的影响 | 第39-41页 |
| 4 总结与讨论 | 第41-44页 |
| 4.1 总结 | 第41页 |
| 4.2 讨论 | 第41-43页 |
| 4.2.1 古菌复制过程中的调控机制 | 第41-42页 |
| 4.2.2 古菌的PCNA被磷酸化修饰后对StPolB1聚合活性影响 | 第42-43页 |
| 4.3 展望 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
