| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-31页 |
| 1 猪繁殖与呼吸综合征病毒 | 第11-23页 |
| 1.1 病原学 | 第11-13页 |
| 1.2 分子生物学研究 | 第13-16页 |
| 1.2.1 病毒组的基因结构和特点 | 第13-14页 |
| 1.2.2 编码蛋白的结构和功能 | 第14-15页 |
| 1.2.3 分子遗传变异 | 第15-16页 |
| 1.2.3.1 ORF1的遗传变异 | 第15页 |
| 1.2.3.2 结构蛋白编码区的遗传变异 | 第15-16页 |
| 1.3 流行病学研究 | 第16-17页 |
| 1.4 诊断检测技术 | 第17-22页 |
| 1.4.1 临床诊断 | 第17-18页 |
| 1.4.1.1 经典PRRS临床诊断标准 | 第17页 |
| 1.4.1.2 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒临床诊断 | 第17-18页 |
| 1.4.2 实验室诊断 | 第18-22页 |
| 1.4.2.1 病毒分离 | 第18-19页 |
| 1.4.2.2 血清学诊断 | 第19-20页 |
| 1.4.2.3 分子生物学诊断 | 第20-22页 |
| 1.5 预防与控制 | 第22-23页 |
| 1.5.1 预防 | 第22页 |
| 1.5.2 控制 | 第22-23页 |
| 2 NASBA技术的研究进展 | 第23-29页 |
| 2.1 NASBA反应原理 | 第23-25页 |
| 2.2 NASBA技术特点 | 第25-27页 |
| 2.2.1 反应迅速 | 第25-26页 |
| 2.2.2 等温过程 | 第26页 |
| 2.2.3 特异性强 | 第26页 |
| 2.2.4 敏感性高 | 第26页 |
| 2.2.5 适用范围广 | 第26-27页 |
| 2.3 NASBA在动物病原微生物上的应用 | 第27-29页 |
| 2.3.1 检测禽流感病毒 | 第27-28页 |
| 2.3.2 检测新城疫病毒 | 第28页 |
| 2.3.3 检测口蹄疫病毒 | 第28页 |
| 2.3.4 检测狂犬病病毒 | 第28页 |
| 2.3.5 检测产单核细胞李斯特菌 | 第28-29页 |
| 3 生物素亲和素酶联免疫吸附试验 | 第29-31页 |
| 第二章 PRRSV非结构蛋白Nsp2基因的序列测定与分析 | 第31-42页 |
| 1 材料 | 第31页 |
| 1.1 主要试剂 | 第31页 |
| 1.2 试验仪器 | 第31页 |
| 1.3 病毒来源和细胞 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-36页 |
| 2 1 RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2 引物的设计和合成 | 第32页 |
| 2.3 Nsp2基因的PCR扩增 | 第32-34页 |
| 2.3.1 RT反应 | 第32页 |
| 2.3.2 Nsp2(1,6)片段的PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.3.3 Nsp2(3,4)片段的PCR扩增 | 第33页 |
| 2.3.4 Nsp2(2,5)片段的PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.4 基因PCR产物的纯化回收 | 第34页 |
| 2.5 PCR回收产物的克隆 | 第34-36页 |
| 2.5.1 PMD-18T Vector和PRRSV的目的片段的连接 | 第34页 |
| 2.5.2 感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.5.3 转化 | 第35页 |
| 2.5.4 质粒的提取 | 第35页 |
| 2.5.5 重组质粒的筛选 | 第35-36页 |
| 2.5.6 测序 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-40页 |
| 3.1 Nsp2的扩增 | 第36-37页 |
| 3.2 Nsp2酶切图片 | 第37页 |
| 3.3 Nsp2基因的序列测定和分析 | 第37-40页 |
| 3.3.1 将测序所得结果拼接可以得到Nsp2序列 | 第37-39页 |
| 3.3.2 FJ07A株与其他PRRSV毒株的Nsp2核苷酸序列同源性比较 | 第39-40页 |
| 3.3.3 FJ07A株Nsp2与其它株的Nsp2核苷酸序列进化树分析 | 第40页 |
| 4 结果 | 第40-42页 |
| 第三章 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NASBA-ELISA方法的建立 | 第42-51页 |
| 1 材料 | 第42页 |
| 1.1 病毒毒株与细胞 | 第42页 |
| 1.2 实验试剂 | 第42页 |
| 1.3 实验仪器 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-45页 |
| 2.1 引物与探针的设计与合成 | 第42-43页 |
| 2.2 RNA的提取 | 第43页 |
| 2.3 DNA的提取 | 第43页 |
| 2.4 NASBA反应体系的建立 | 第43-44页 |
| 2.4.1 DMSO浓度的确定 | 第44页 |
| 2.5 NASBA扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第44页 |
| 2.6 NASBA-ELISA方法的建立 | 第44-45页 |
| 2.6.1 包被板条的选择 | 第44-45页 |
| 2.6.2 孵育时问的确定 | 第45页 |
| 2.6.3 NASBA-ELISA方法的特异性测定 | 第45页 |
| 2.6.4 NASBA-ELISA方法的敏感性测定 | 第45页 |
| 2.6.5 NASBA-ELISA方法的重复性测定 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-49页 |
| 3.1 FJ07A株NASBA扩增产物的特异性检测 | 第45-46页 |
| 3.2 NASBA体系中最佳DMSO浓度的确定 | 第46-47页 |
| 3.4 NASBA扩增产物的ELISA检测 | 第47-49页 |
| 3.4.1 不同来源板条的ELISA检测结果 | 第47页 |
| 3.4.2 ELISA孵育时间的确定 | 第47-48页 |
| 3.4.3 特异性测定 | 第48页 |
| 3.4.5 敏感性测定 | 第48页 |
| 3.4.6 重复性测定 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
