| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 烟草种质资源研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1 我国烟草种质资源的现状 | 第13-14页 |
| 1.2 抗病烟草种质资源的研究概况 | 第14-15页 |
| 1.3 烟草种质资源鉴定方法的研究概况 | 第15-17页 |
| 1.3.1 直接鉴定和间接鉴定法 | 第16页 |
| 1.3.2 自然鉴定和诱发鉴定法 | 第16页 |
| 1.3.3 当地鉴定和异地鉴定法 | 第16-17页 |
| 2 分子标记在烟草研究中的应用 | 第17-20页 |
| 2.1 分子标记的概述 | 第17页 |
| 2.2 分子标记在烟草研究中的应用 | 第17-20页 |
| 2.2.1 RAPD分子标记在烟草研究中的应用 | 第17-18页 |
| 2.2.2 AFLP分子标记在烟草研究中的应用 | 第18页 |
| 2.2.3 ISSR分子标记在烟草研究中的应用 | 第18-20页 |
| 3 抗烟草花叶病基因工程的研究进展 | 第20-24页 |
| 3.1 植物抗花叶病基因的应用 | 第21页 |
| 3.2 烟草花叶病毒(TMV)外壳蛋白基因的研究进展 | 第21-22页 |
| 3.3 烟草花叶病毒(TMV)复制酶基因的研究进展 | 第22-23页 |
| 3.4 突变烟草花叶病毒(TMV)运动蛋白基因的研究进展 | 第23页 |
| 3.5 RNA干扰技术的应用 | 第23-24页 |
| 4 本研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 第二章 烟草种质资源遗传多样性和亲缘关系的ISSR分析 | 第25-48页 |
| 1 材料与方法 | 第25-30页 |
| 1.1 材料 | 第25-27页 |
| 1.1.1 供试植物材料 | 第25-27页 |
| 1.1.2 引物 | 第27页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第27页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第27页 |
| 1.2 方法 | 第27-30页 |
| 1.2.1 试验设计 | 第27-28页 |
| 1.2.2 烟草基因组DNA的提取、纯化和检测 | 第28页 |
| 1.2.3 ISSR PCR反应 | 第28-29页 |
| 1.2.4 电泳检测 | 第29页 |
| 1.2.5 相似系数和聚类分析 | 第29-30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-46页 |
| 2.1 ISSR引物的筛选 | 第30-31页 |
| 2.2 ISSR反应体系的优化 | 第31-34页 |
| 2.3 ISSR遗传多样性分析 | 第34-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 3.1 ISSR分子标记法分析烟草基因组DNA的多态性与稳定性 | 第46-47页 |
| 3.2 ISSR分子标记法分析烟草种质的亲缘关系 | 第47-48页 |
| 第三章 不同烟草种质花叶病抗性分子鉴定与田间鉴定的比较 | 第48-69页 |
| 1 材料与方法 | 第48-54页 |
| 1.1 材料 | 第48-50页 |
| 1.1.1 烟草种质花叶病抗性的分子鉴定分析 | 第48-49页 |
| 1.1.1.1 供试植物材料 | 第48-49页 |
| 1.1.1.2 供试菌种 | 第49页 |
| 1.1.1.3 引物设计 | 第49页 |
| 1.1.1.4 主要分子生物学及生化试剂 | 第49页 |
| 1.1.1.5 主要仪器设备 | 第49页 |
| 1.1.2 烟草种质花叶病抗性的田间鉴定分析 | 第49-50页 |
| 1.1.2.1 供试植物材料 | 第49页 |
| 1.1.2.2 供试病毒源 | 第49-50页 |
| 1.1.2.3 主要试剂 | 第50页 |
| 1.2 方法 | 第50-54页 |
| 1.2.1 烟草种质花叶病抗性的分子鉴定分析 | 第50-53页 |
| 1.2.1.1 烟草基因组DNA的提取、纯化和检测 | 第50页 |
| 1.2.1.2 PCR扩增反应 | 第50页 |
| 1.2.1.3 回收PCR产物 | 第50-51页 |
| 1.2.1.4 制备大肠杆菌感受态细胞 | 第51页 |
| 1.2.1.5 连接目的片段 | 第51-52页 |
| 1.2.1.6 转化大肠杆菌 | 第52页 |
| 1.2.1.7 提取重组子质粒DNA | 第52页 |
| 1.2.1.8 重组质粒DNA的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| 1.2.1.9 测定目的片段的序列 | 第53页 |
| 1.2.1.10 烟草抗花叶病基因目的片段的序列分析 | 第53页 |
| 1.2.2 烟草种质花叶病抗性的田间鉴定分析 | 第53-54页 |
| 1.2.2.1 试验设计 | 第53页 |
| 1.2.2.2 汁液摩擦接种诱发 | 第53页 |
| 1.2.2.3 烟草普通花叶病的田间调查 | 第53-54页 |
| 1.2.2.4 烟草普通花叶病的病害严重度分级 | 第54页 |
| 1.2.2.5 烟草普通花叶病的抗性分级 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-67页 |
| 2.1 烟草种质花叶病抗性的分子鉴定结果与分析 | 第54-61页 |
| 2.1.1 烟草抗花叶病基因(cn)目的片段的获得 | 第54-55页 |
| 2.1.2 目的片段的回收与鉴定 | 第55-56页 |
| 2.1.3 cn基因核苷酸序列的分析 | 第56-60页 |
| 2.1.4 烟草抗花叶病基因(cn)的进化分析 | 第60-61页 |
| 2.2 烟草种质花叶病抗性的田间鉴定结果与分析 | 第61-64页 |
| 2.3 烟草种质花叶病抗性的分子鉴定与田间鉴定结果的对比分析 | 第64-67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| 第四章 半定量RT-PCR法检测抗烟草花叶病基因的表达 | 第69-76页 |
| 1 材料与方法 | 第69-72页 |
| 1.1 材料 | 第69-70页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第69页 |
| 1.1.2 引物设计 | 第69页 |
| 1.1.3 主要分子生物学及生化试剂 | 第69-70页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第70页 |
| 1.2 方法 | 第70-72页 |
| 1.2.1 试验设计 | 第70页 |
| 1.2.2 提取烟草总RNA | 第70-71页 |
| 1.2.3 合成cDNA第一链 | 第71页 |
| 1.2.4 烟草抗花叶病基因的PCR扩增 | 第71-72页 |
| 1.2.5 电泳检测 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-75页 |
| 2.1 烟草总RNA的提取与电泳检测 | 第72-74页 |
| 2.2 接种TMV后烟草抗花叶病基因于不同处理时间的表达 | 第74-75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 第五章 本研究的主要结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 附录1 部分试剂配方 | 第85页 |
| 附录2 缩略词 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
