| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一部分 引言 | 第10-23页 |
| 1.1 植物冷胁迫 | 第10-13页 |
| 1.1.1 植物的冷驯化及其影响因素 | 第10-11页 |
| 1.1.2 植物响应低温胁迫的生理生化和分子生物学机制 | 第11-13页 |
| 1.2 MIRNA(MICRORNA)微小RNA | 第13-21页 |
| 1.2.1 miRNA的特点 | 第13-14页 |
| 1.2.2 miRNA的生物合成 | 第14页 |
| 1.2.3 植物miRNA的作用方式 | 第14页 |
| 1.2.4 植物中miRNA的生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.2.5 miRNA的预测及验证方法 | 第15-18页 |
| 1.2.6 植物逆境胁迫响应的miRNA | 第18-20页 |
| 1.2.7 miRNA与植物抗病性 | 第20-21页 |
| 1.3 高山离子芥在植物耐寒、抗冻机理研究中的意义 | 第21-22页 |
| 1.4 本论文研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第23-35页 |
| 2.1 冷胁迫调控的MIRNA的高通量测序 | 第23-25页 |
| 2.1.1 实验材料及处理 | 第23页 |
| 2.1.2 高山离子芥总RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.1.3 深度测序 | 第24页 |
| 2.1.4 小RNAs的处理和miRNA鉴定/预测 | 第24页 |
| 2.1.5 sRNAs和靶基因的表达分析 | 第24-25页 |
| 2.1.6 功能基因的基因本体论(GO)特征 | 第25页 |
| 2.2 实时定量PCR验证MIRNA的表达的实验材料与方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.2.2 引物序列 | 第25-27页 |
| 2.2.3 高山离子芥总RNA的提取(方法同前) | 第27页 |
| 2.2.4 DNaseI(RNase free)处理总RNA | 第27-28页 |
| 2.2.5 反转录为cDNA | 第28页 |
| 2.2.6 实时定量PCR(qPCR)内参基因的筛选 | 第28-29页 |
| 2.2.7 实时定量PCR(qPCR)分析 | 第29-30页 |
| 2.3 高山离子芥基因的克隆 | 第30-33页 |
| 2.3.1 实验材料及处理 | 第30页 |
| 2.3.2 总RNA的提取(同前) | 第30页 |
| 2.3.3 反转录获得cDNA | 第30页 |
| 2.3.4 CB7248长片段的获得 | 第30-31页 |
| 2.3.5 高山离子芥CB7248短片段的获得 | 第31-33页 |
| 2.4 DC3000菌液浸染实验方法 | 第33-34页 |
| 2.4.1 实验材料 | 第33页 |
| 2.4.2 实验方法 | 第33-34页 |
| 2.5 高山离子芥耐冷生理学研究 | 第34-35页 |
| 2.5.1 实验材料及处理 | 第34页 |
| 2.5.2 电导率的测定 | 第34页 |
| 2.5.3 相对细胞活力的测定 | 第34-35页 |
| 第三部分 实验结果 | 第35-47页 |
| 3.1 低温胁迫调控的MIRNAs和它的靶基因发现和表达分析 | 第35-41页 |
| 3.1.1 mRNA转录组测序数据 | 第35页 |
| 3.1.2 miRNAs测序 | 第35-37页 |
| 3.1.3 在高山离子芥中鉴别出冷胁迫调控的保守miRNAs | 第37-38页 |
| 3.1.4 高山离子芥中冷胁迫调节miRNAs(CSR miRNAs)的预测 | 第38-39页 |
| 3.1.5 高山离子芥中保守的miRNAs和CSRmiRNA预测的目标功能基因的GO分析 | 第39-41页 |
| 3.2 MIRNA的实时定量QPCR表达分析 | 第41-43页 |
| 3.2.1 miRNA实时定量qPCR内参基因的筛选 | 第41-42页 |
| 3.2.2 miRNA实时定量qPCR表达分析 | 第42-43页 |
| 3.3 CB7248基因的克隆 | 第43-44页 |
| 3.4 DC3000菌液浸染拟南芥 | 第44-45页 |
| 3.5 高山离子芥生理学研究 | 第45-47页 |
| 第四部分 讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 深度测序结果、基因表达分析 | 第47页 |
| 4.2 MIRNA的实时荧光定量PCR表达分析 | 第47-48页 |
| 4.3 高山离子芥耐冷、抗冻的生理学研究 | 第48-50页 |
| 第五部分 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 缩略词表 | 第57-58页 |
| 在学期间的研究成果 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
