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Synechocystis sp.PCC 6803中Slr0280的功能、结构研究及ApcD光谱红移探究

摘要第7-9页
ABSTRACT第9-10页
缩略词表第11-12页
1 序言第12-35页
    1.1 Synechocystis 6803遗传特征第12-13页
    1.2 蓝细菌膜系统的介绍第13-17页
    1.3 Synechocystis 6803营养类型第17-18页
    1.4 蓝细菌的CO_2浓缩机制第18-21页
    1.5 蓝细菌捕光系统第21-22页
    1.6 蓝细菌组学的研究第22-29页
        1.6.1 蓝细菌基因组学研究第22-23页
        1.6.2 蓝细菌转录组学第23-24页
        1.6.3 蓝细菌蛋白组学研究第24-27页
        1.6.4 代谢组学研究第27-28页
        1.6.5 组学的交叉应用第28-29页
    1.7 蓝细菌研究中常用的数据库第29-30页
    1.8 Synechocystis 6803碳代谢特征及研究进展第30-34页
    1.9 本课题的研究目的与意义第34-35页
2 Slr0280的功能及结构研究第35-108页
    2.1 序言第35-36页
    2.2 实验材料第36-41页
        2.2.1 菌种与质粒第36页
        2.2.2 培养基第36-37页
        2.2.3 试剂第37-38页
        2.2.4 试剂配制第38-40页
        2.2.5 实验仪器第40-41页
    2.3 实验方法第41-74页
        2.3.1 藻基因组DNA的提取第41页
        2.3.2 小量感受态细胞的制备及转化第41-42页
        2.3.3 碱裂解法小量质粒的提取第42页
        2.3.4 突变体的构建第42-45页
        2.3.5 突变体的筛选第45页
        2.3.6 不同条件下的培养第45-46页
        2.3.7 生长曲线的测定第46页
        2.3.8 细胞内叶绿素a含量的测定第46页
        2.3.9 葡萄糖摄取的测定第46-48页
        2.3.10 细胞内糖原含量的测定第48页
        2.3.11 藻细胞的电镜观测第48页
        2.3.12 光合作用活性的测定第48-49页
        2.3.13 Slr0280细胞定位分析第49-52页
        2.3.14 转录水平分析第52-57页
        2.3.15 蛋白组学分析第57-66页
        2.3.16 酶活性分析第66-67页
        2.3.17 Slr0280的系统进化树分析第67页
        2.3.18 Slr0280相互作用亚文库的筛选第67-72页
        2.3.19 Slr0280的晶体结构研究第72-74页
            2.3.19.1 Slr0280的表达与纯化第72页
            2.3.19.2 Slr0280中甲硫氨酸硒代化表达与纯化第72-73页
            2.3.19.3 Slr0280结晶条件的筛选及优化第73-74页
            2.3.19.4 晶体衍射数据的收集及处理第74页
    2.4 结果与分析第74-105页
        2.4.1 突变体的筛选与鉴定第74-75页
        2.4.2 不同条件下?slr0280的生长曲线的测定第75-79页
        2.4.3 slr0280对其邻近基因无极性效应第79页
        2.4.4 互补及超表达实验第79-80页
        2.4.5 Slr0280对葡萄糖的利用具有正调控作用第80-81页
        2.4.6 ?slr0280糖原含量高于WT第81-84页
        2.4.7 Slr0280对OPP途径具有正调节作用第84页
        2.4.8 Slr0280影响细胞的光合作用活性第84-86页
        2.4.9 混养条件下?slr0280中相关基因的转录水平变化第86-92页
        2.4.10 混养条件下?slr0280中的蛋白组学水平变化第92-97页
        2.4.11 Slr0280是一个含多结构域的保守的周质蛋白第97-100页
        2.4.12 Slr0280相互作用蛋白的筛选第100-102页
        2.4.13 Slr0280的晶体结构第102-105页
    2.5 总结第105-108页
3 Synechocystis 6803 AP-B中ApcD的定点突变第108-125页
    3.1 序言第108-110页
    3.2 材料与方法第110页
        3.2.1 菌种与质粒第110页
        3.2.2 培养基第110页
        3.2.3 试剂第110页
        3.2.4 溶液配制第110页
        3.2.5 实验仪器第110页
    3.3 实验方法第110-113页
        3.3.1 APC(AP-B),CPC生物信息学分析第110-111页
        3.3.2 ApcD突变体的构建第111-112页
        3.3.3 ApcD与PCB的体内重组第112页
        3.3.4 色素化ApcD的表达与纯化第112页
        3.3.5 ApcD的光谱测定第112页
        3.3.6 摩尔消光系数及荧光量子产率的计算第112-113页
        3.3.7 聚集态的确定第113页
    3.4 结果与分析第113-123页
        3.4.1 APC(AP-B),CPC生物信息学分析第113-115页
        3.4.2 ApcD突变体的克隆及表达第115-116页
        3.4.3 ApcD色素结合类型的确定第116-117页
        3.4.4 ApcD突变体的光谱特征第117-121页
        3.4.5 ApcD及其突变体的聚集态分析第121-122页
        3.4.6 尿素对ApcD及其突变的影响第122-123页
    3.5 总结第123-125页
参考文献第125-142页
附录1 攻读博士期间发表的学术论文第142-143页
附录2 文章中主要载体的图谱第143-146页
致谢第146-147页

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