| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 符号和缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 前言 | 第13页 |
| 1.2 灰葡萄孢致病相关基因的研究 | 第13-17页 |
| 1.2.1 HOG通路及相关基因功能的研究 | 第14-15页 |
| 1.2.2 灰葡萄孢抗氧反应的研究 | 第15页 |
| 1.2.3 灰葡萄孢分泌天门冬氨酸蛋白酶 | 第15页 |
| 1.2.4 灰葡萄孢BcFKBP12 | 第15-16页 |
| 1.2.5 灰葡萄孢与ABC转运因子 | 第16-17页 |
| 1.3 灰葡萄孢几丁质合酶的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.1 灰葡萄孢几丁质合酶Ⅰ(BcchsⅠ)的基因功能 | 第17-18页 |
| 1.3.2 灰葡萄孢几丁质合酶Ⅲ(BcchsⅢ)的基因功能 | 第18页 |
| 1.3.3 灰葡萄孢几丁质合酶Ⅴ(BcchsⅤ)的基因功能 | 第18-19页 |
| 1.4 选题意义 | 第19-21页 |
| 第二章 构建灰葡萄孢突变体库 | 第21-28页 |
| 2.1 前言 | 第21页 |
| 2.2 材料 | 第21-22页 |
| 2.2.1 菌株 | 第21页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.3 培养基 | 第22页 |
| 2.3 方法 | 第22-25页 |
| 2.3.1 菌株的活化和培养 | 第23页 |
| 2.3.2 农杆菌介导的灰葡萄孢的转化 | 第23-24页 |
| 2.3.3 转化子的筛选 | 第24页 |
| 2.3.4 转化子的分离纯化 | 第24页 |
| 2.3.5 突变株的单孢分离、生长速率的测量、观察及保存 | 第24-25页 |
| 2.4 结果与分析 | 第25-26页 |
| 2.4.1 灰葡萄孢突变株的筛选和单孢分离 | 第25页 |
| 2.4.2 灰葡萄孢突变株的生长速率及产孢情况 | 第25-26页 |
| 2.5 小结 | 第26-28页 |
| 第三章 利用CFW筛选灰葡萄孢突变体库中与细胞壁合成缺陷有关的突变株 | 第28-37页 |
| 3.1 前言 | 第28页 |
| 3.2 材料 | 第28-29页 |
| 3.2.1 菌株 | 第28页 |
| 3.2.2 培养基 | 第28页 |
| 3.2.3 引物 | 第28-29页 |
| 3.2.4 试剂和仪器 | 第29页 |
| 3.3 方法 | 第29-31页 |
| 3.3.1 确定最适CFW筛选浓度 | 第29页 |
| 3.3.2 利用CFW进行初筛 | 第29-30页 |
| 3.3.3 转化子的潮霉素抗性基因鉴定 | 第30页 |
| 3.3.4 对初筛转化子进行其它表型鉴定和孢子观察 | 第30-31页 |
| 3.3.5 突变株的致病性观察 | 第31页 |
| 3.4 结果与分析 | 第31-35页 |
| 3.4.1 CFW的最终筛选浓度 | 第31页 |
| 3.4.2 经过CFW初筛后的突变株表型 | 第31-32页 |
| 3.4.3 CFW敏感性突变株的潮霉素抗性鉴定 | 第32-33页 |
| 3.4.4 CFW敏感性突变株的其它表型 | 第33-34页 |
| 3.4.5 CFW敏感性突变株的孢子观察结果 | 第34-35页 |
| 3.4.6 CFW敏感性突变株对蕃茄叶片的侵染性实验 | 第35页 |
| 3.5 小结 | 第35-37页 |
| 第四章 灰葡萄孢几丁质合酶Ⅵ基因敲除菌株的构建 | 第37-57页 |
| 4.1 前言 | 第37页 |
| 4.2 材料 | 第37-40页 |
| 4.2.1 菌株 | 第38页 |
| 4.2.2 载体和引物 | 第38-39页 |
| 4.2.3 培养基 | 第39页 |
| 4.2.4 试剂和仪器 | 第39-40页 |
| 4.3 方法 | 第40-48页 |
| 4.3.1 克隆BcchsⅥ基因的上下游片段并连入入门载体pETHG | 第40-44页 |
| 4.3.2 双元载体的构建 | 第44-46页 |
| 4.3.3 农杆菌介导的转化灰葡萄孢转化 | 第46页 |
| 4.3.4 敲除突变子的筛选 | 第46-47页 |
| 4.3.5 敲除突变株的分子鉴定 | 第47-48页 |
| 4.4 结果与分析 | 第48-55页 |
| 4.4.1 克隆BcchsⅥ基因的上下游片段并连入载体pETHG | 第48-51页 |
| 4.4.2 双元载体的构建 | 第51-53页 |
| 4.4.3 将双元载体pCAMBIA-Bar-△chs6转入感受态农杆菌AGL_1 | 第53页 |
| 4.4.4 农杆菌介导的灰葡萄孢转化 | 第53-54页 |
| 4.4.5 敲除突变子的筛选 | 第54-55页 |
| 4.4.6 敲除突变子的分子鉴定 | 第55页 |
| 4.5 小结 | 第55-57页 |
| 第五章 灰葡萄孢几丁质合酶Ⅵ的基因功能研究 | 第57-68页 |
| 5.1 前言 | 第57页 |
| 5.2 材料 | 第57-58页 |
| 5.2.1 菌株 | 第57页 |
| 5.2.2 试剂和仪器 | 第57-58页 |
| 5.3 方法 | 第58-61页 |
| 5.3.1 观察表型和测定生长速率 | 第58页 |
| 5.3.2 对CFW的敏感性测定 | 第58页 |
| 5.3.3 药物敏感性实验 | 第58页 |
| 5.3.4 番茄叶片侵染实验 | 第58-59页 |
| 5.3.5 BcchsⅥ基因突变株几丁质含量测定 | 第59-61页 |
| 5.4 结果与分析 | 第61-66页 |
| 5.4.1 突变株的表型和生长速率 | 第61-62页 |
| 5.4.2 对CFW的敏感性实验 | 第62-63页 |
| 5.4.3 对药物敏感性实验 | 第63-64页 |
| 5.4.4 番茄叶片侵染实验 | 第64-65页 |
| 5.4.5 葡糖胺含量标准曲线的制作 | 第65-66页 |
| 5.4.6 测定Bcchs Ⅵ基因突变株几丁质含量 | 第66页 |
| 5.5 小结 | 第66-68页 |
| 第六章 总结与展望 | 第68-70页 |
| 6.1 总结 | 第68-69页 |
| 6.2 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第77页 |
