| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| 1. 阳离子抗菌肽 | 第8-10页 |
| ·研究进展 | 第8-9页 |
| ·颗粒裂解肽G13结构域 | 第9-10页 |
| 2. 分泌表达系统 | 第10-14页 |
| ·大肠杆菌分泌表达系统 | 第10-11页 |
| ·毕赤酵母分泌表达系统 | 第11-14页 |
| 3. 本研究的目的和意义 | 第14-16页 |
| 第二章 原核分泌表达体系的构建 | 第16-30页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·菌株和质粒 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·工具酶 | 第16页 |
| ·相关化学试剂及试剂盒 | 第16-17页 |
| ·主要实验仪器 | 第17-18页 |
| ·方法 | 第18-24页 |
| ·G13基因片段及相关引物的设计合成 | 第18页 |
| ·G13与融合蛋白的拼接设计及目的片段的获取 | 第18-20页 |
| ·目的片段的回收 | 第20页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第20-21页 |
| ·DNA片段的连接和转化 | 第21-22页 |
| ·重组子的筛选 | 第22页 |
| ·诱导表达 | 第22-23页 |
| ·蛋白电泳检测 | 第23-24页 |
| ·结果 | 第24-28页 |
| ·重组子的鉴定 | 第24-26页 |
| ·G13在大肠杆菌中的表达 | 第26-28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 真核分泌表达体系的构建 | 第30-43页 |
| ·材料 | 第30-32页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·相关培养基 | 第30-31页 |
| ·工具酶 | 第31页 |
| ·相关化学试剂及试剂盒 | 第31-32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-38页 |
| ·G13基因片段及引物的设计合成 | 第32页 |
| ·目的片段的获取 | 第32-33页 |
| ·TA克隆、转化、鉴定 | 第33-34页 |
| ·穿梭质粒在大肠杆菌中的筛选 | 第34-35页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·待整合基因片段的制备及电击转化 | 第36-37页 |
| ·酵母重组子的筛选 | 第37页 |
| ·诱导表达及活性检测 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-41页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第38-40页 |
| ·酵母重组子的筛选 | 第40页 |
| ·G13在毕赤酵母中的表达 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 其余阳离子抗菌肽重组质粒的构建 | 第43-45页 |
| ·Pleurocidin和hBD-3 | 第43页 |
| ·pPIC9-Ple、pPIC9-HBD-3的构建 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的验证 | 第44-45页 |
| 第五章 来自巢湖产毒微囊藻株的分离、纯化、保存 | 第45-55页 |
| ·材料 | 第45-47页 |
| ·藻类的采集及处理 | 第45页 |
| ·质粒及菌株 | 第45页 |
| ·相关培养基 | 第45-46页 |
| ·工具酶及相关试剂 | 第46-47页 |
| ·主要实验仪器 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-50页 |
| ·藻样的预备养 | 第47页 |
| ·藻株的分离、纯化 | 第47页 |
| ·产毒基因序列的PCR扩增及鉴定 | 第47-49页 |
| ·藻毒素的粗制备及鉴定 | 第49-50页 |
| ·冻存及复苏方式的交叉实验 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-53页 |
| ·铜绿微囊藻藻株的获取 | 第50-51页 |
| ·产毒区基因序列比对分析 | 第51-52页 |
| ·藻毒素的HPLC分析 | 第52-53页 |
| ·藻株最适保存方式的分析 | 第53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第六章 全文结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第62页 |