摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
第一章 绪论 | 第12-24页 |
1.1 维生素受体 | 第12-17页 |
1.1.1 维生素D受体概述 | 第12-13页 |
1.1.2 维生素D受体的功能结构域 | 第13-16页 |
1.1.3 维生素D受体反应元件 | 第16-17页 |
1.2 PPAR概述 | 第17-21页 |
1.2.1 PPARγ 与脂肪细胞的关系 | 第19-20页 |
1.2.2 PPARγ 与疾病信号传导 | 第20-21页 |
1.3 维生素D受体与脂肪细胞相关研究进展 | 第21-24页 |
第二章 维生素D受体在脂肪组织中的表达定位研究 | 第24-32页 |
2.0 引言 | 第24-25页 |
2.1 试验材料 | 第25-26页 |
2.1.1 试验动物 | 第25页 |
2.1.2 抗体及所需试剂 | 第25页 |
2.1.3 仪器设备 | 第25-26页 |
2.2 实验方法 | 第26-27页 |
2.2.1 脂肪组织石蜡切片制作方法 | 第26页 |
2.2.2 脂肪组织HE染色方法 | 第26页 |
2.2.3 脂肪组织免疫荧光染色方法 | 第26-27页 |
2.2.4 肪组织 RNA 提取与反转录方法 | 第27页 |
2.3 实验结果 | 第27-29页 |
2.3.1 大鼠皮下脂肪组织HE染色结果 | 第27-28页 |
2.3.2 大鼠皮下脂肪组织免疫荧光染色结果 | 第28页 |
2.3.3 大鼠不同部位脂肪组织PCR半定量分析结果 | 第28-29页 |
2.4 小结 | 第29-32页 |
第三章 SD大鼠原代脂肪细胞分离培养及诱导分化 | 第32-36页 |
3.1 试验材料 | 第32页 |
3.1.1 试验动物 | 第32页 |
3.1.2 培养基及所需试剂 | 第32页 |
3.1.3 仪器设备 | 第32页 |
3.2 实验方法 | 第32-33页 |
3.2.1 脂肪细胞的分离 | 第32-33页 |
3.2.2 脂肪细胞的培养 | 第33页 |
3.3 实验结果 | 第33-35页 |
3.3.1 脂肪细胞培养结果 | 第33-35页 |
3.4 讨论 | 第35-36页 |
第四章 维生素D受体与PPARg基因表达研究 | 第36-46页 |
4.0 引言 | 第36页 |
4.1 试验材料 | 第36-37页 |
4.1.1 试验动物 | 第36-37页 |
4.1.2 培养基及所需试剂 | 第37页 |
4.1.3 仪器设备 | 第37页 |
4.2 实验方法 | 第37-39页 |
4.2.1 Bodipy染色 | 第37页 |
4.2.2 细胞免疫荧光染色 | 第37-38页 |
4.2.3 qPCR检测基因表达量 | 第38页 |
4.2.4 Western Blot检测蛋白质表达量 | 第38-39页 |
4.3 结果 | 第39-43页 |
4.3.1 细胞分化各阶段脂滴荧光染色结果 | 第39-40页 |
4.3.2 细胞分化各阶段VDR免疫荧光染色结果 | 第40-42页 |
4.3.3 细胞分化各阶段VDR蛋白表达结果 | 第42页 |
4.3.4 细胞分化各阶段VDR基因表达结果 | 第42-43页 |
4.4 讨论 | 第43-46页 |
第五章 维生素D受体超表达载体构建及功能分析 | 第46-56页 |
5.1 引言 | 第46-47页 |
5.2 试验材料 | 第47-48页 |
5.2.1 细菌及细胞 | 第47页 |
5.2.2 酶和所需试剂 | 第47页 |
5.2.3 仪器设备 | 第47-48页 |
5.3 试验方法 | 第48-51页 |
5.3.1 引物设计与合成 | 第48页 |
5.3.2 目的基因的PCR扩增 | 第48页 |
5.3.3 目的片段和载体的双酶切、回收、和纯化 | 第48-49页 |
5.3.4 目的基因与载体的连接与转化DH5α | 第49页 |
5.3.5 菌液PCR检测阳性菌落 | 第49页 |
5.3.6 293T细胞及Hela细胞培养 | 第49-50页 |
5.3.7 重组质粒转染 293T细胞和Hela细胞 | 第50页 |
5.3.8 Western Blot及qPCR分析 | 第50-51页 |
5.4 结果 | 第51-54页 |
5.4.1 目的基因PCR扩增,双酶切及阳性克隆鉴定结果 | 第51-52页 |
5.4.2 293T细胞及Hela细胞形态观察及质粒转染结果 | 第52页 |
5.4.3 Western Blot结果 | 第52-53页 |
5.4.4 qPCR结果 | 第53-54页 |
5.5 讨论 | 第54-56页 |
结论 | 第56-58页 |
小结 | 第56页 |
创新点 | 第56页 |
研究展望 | 第56-58页 |
参考文献 | 第58-62页 |
中英文缩略词表 | 第62-64页 |
附图 | 第64-66页 |
攻读硕士学位期间学术成果 | 第66-68页 |
致谢 | 第68页 |