| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 前言 | 第9-14页 |
| 1 斯达油脂酵母的利用现状与研究意义 | 第9-10页 |
| 2 细胞自噬的研究背景 | 第10-12页 |
| 2.1 自噬的定义 | 第10-11页 |
| 2.2 自噬的诱导与调控 | 第11页 |
| 2.3 磷脂酰肌醇-3-激酶复合物 | 第11页 |
| 2.4 两种泛素样蛋白质共轭系统 | 第11-12页 |
| 2.5 Atg9及其循环系统 | 第12页 |
| 2.6 生物大分子的循环利用 | 第12页 |
| 3 细胞自噬与油脂降解的关系 | 第12-13页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第13-14页 |
| 材料与方法 | 第14-24页 |
| 1 材料 | 第14-16页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第14页 |
| 1.2 培养基 | 第14-15页 |
| 1.3 主要试剂及配制 | 第15-16页 |
| 1.4 重要的试验仪器与设备 | 第16页 |
| 2 实验方法 | 第16-24页 |
| 2.1 菌种保存 | 第16页 |
| 2.2 斯达油脂酵母的活化与培养 | 第16-17页 |
| 2.3 斯达油脂酵母中自噬核心蛋白的鉴定 | 第17页 |
| 2.4 生长曲线的测定 | 第17页 |
| 2.5 油脂含量的检测 | 第17页 |
| 2.6 油脂积累曲线的测定 | 第17页 |
| 2.7 酵母的尼罗红染色及荧光显微观察 | 第17页 |
| 2.8 酵母RNA的提取 | 第17页 |
| 2.9 cDNA的合成 | 第17-18页 |
| 2.10 酵母双杂交实验 | 第18-22页 |
| 2.10.1 猎物质粒和诱饵质粒的构建 | 第18-20页 |
| 2.10.1.1 斯达油脂酵母和酿酒酵母RNA的提取及cDNA的合成 | 第18页 |
| 2.10.1.2 互作基因的克隆 | 第18-19页 |
| 2.10.1.3 互作基因连接到目的载体上 | 第19-20页 |
| 2.10.2 重组质粒的酵母转化 | 第20-21页 |
| 2.10.2.1 酵母双杂交系统Y2H gold感受态细胞的制备 | 第20页 |
| 2.10.2.2 猎物质粒转化酵母Y2H gold感受态细胞 | 第20页 |
| 2.10.2.3 酵母菌Y2H gold/+Leu感受态细胞的制备 | 第20页 |
| 2.10.2.4 诱饵质粒转化酵母Y2H gold/+Leu感受态细胞 | 第20-21页 |
| 2.10.3 重组质粒的细胞毒性检测和自激活检测 | 第21页 |
| 2.10.4 诱饵质粒和猎物质粒的互作实验 | 第21-22页 |
| 2.11 Real-time PCR对基因表达水平的检测 | 第22页 |
| 2.12 自噬诱导剂-雷帕霉素处理酵母的方法 | 第22页 |
| 2.13 电镜观察 | 第22-23页 |
| 2.14 酵母转染实验 | 第23-24页 |
| 2.14.1 pCDH-puro-LsAtg8重组质粒的构建 | 第23页 |
| 2.14.2 慢病毒包装 | 第23页 |
| 2.14.3 慢病毒转染与荧光显微镜观察 | 第23-24页 |
| 2.14.4 转染菌株的筛选 | 第24页 |
| 结果与分析 | 第24-40页 |
| 1 斯达油脂酵母中自噬核心基因的鉴定 | 第24-26页 |
| 2 斯达油脂酵母中,共轭体系自噬相关蛋白的互作分析 | 第26-30页 |
| 2.1 重组质粒的细胞毒性检测和自激活检测 | 第26-28页 |
| 2.2 诱饵质粒和猎物质粒的互作实验 | 第28-30页 |
| 3 不同油脂积累条件下,共轭体系自噬相关基因的表达 | 第30-33页 |
| 3.1 不同培养条件使酵母产生油脂积累差异 | 第30-32页 |
| 3.2 共轭体系自噬相关基因的表达分析 | 第32-33页 |
| 4 自噬诱导剂对油脂积累的影响 | 第33-35页 |
| 5 自噬体定位于脂滴内部 | 第35-37页 |
| 6 Atg8过表达对油脂积累的影响 | 第37-40页 |
| 6.1 斯达油脂酵母转染方法的建立 | 第37-38页 |
| 6.2 斯达油脂酵母Atg8过表达菌株的筛选 | 第38-39页 |
| 6.3 过表达Atg8对酵母油脂积累的影响 | 第39-40页 |
| 结论与讨论 | 第40-42页 |
| 附录 | 第42-45页 |
| 1 SD培养基(全培养基) | 第42-43页 |
| 2 酵母双杂交质粒pGBKT7和pGADT7 | 第43-44页 |
| 3 pCDH-puro质粒 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
