| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 超氧化物岐化酶的研究综述 | 第15-23页 |
| 引言 | 第15页 |
| 1 超氧化物歧化酶的概念 | 第15-20页 |
| 1.1 SOD的发现和命名 | 第15-16页 |
| 1.2 SOD的种类及分布 | 第16-17页 |
| 1.3 SOD的分子生物学 | 第17-18页 |
| 1.4 SOD的结构和性质 | 第18-19页 |
| 1.5 SOD的功能在各个领域中的应用 | 第19-20页 |
| 2 国内外SOD的研究概况 | 第20页 |
| 3 耐高温SOD的研究进展及意义 | 第20-22页 |
| 3.1 耐高温SOD的研究进展 | 第20-21页 |
| 3.2 耐高温SOD的研究意义 | 第21-22页 |
| 4 家蚕杆状病毒表达系统的研究 | 第22-23页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第23-26页 |
| 1 研究目的和意义 | 第23页 |
| 2 研究内容 | 第23-24页 |
| 3 实验流程图 | 第24-26页 |
| 3.1 SOD蛋白在大肠杆菌系统中的表达与纯化 | 第24-25页 |
| 3.2 SOD发酵工艺 | 第25页 |
| 3.3 SOD蛋白在家蚕杆状病毒系统中的表达 | 第25-26页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第26-35页 |
| 1 序列与生物信息学工具 | 第26页 |
| 1.1 序列 | 第26页 |
| 1.2 生物信息学工具 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-33页 |
| 3.1 耐高温SOD蛋白的基因序列 | 第27-28页 |
| 3.2 耐高温SOD蛋白的二级结构预测 | 第28-29页 |
| 3.3 耐高温SOD蛋白的高级结构预测 | 第29页 |
| 3.4 氨基酸序列的同源性分析 | 第29-30页 |
| 3.5 耐高温SOD蛋白的疏水性分析 | 第30页 |
| 3.6 耐高温SOD蛋白的跨膜区预测分析 | 第30-31页 |
| 3.7 耐高温SOD蛋白的信号肽分析 | 第31-32页 |
| 3.8 耐高温SOD蛋白的磷酸化位点预测分析 | 第32页 |
| 3.9 耐高温SOD蛋白的功能位点预测分析 | 第32-33页 |
| 3.10 耐高温SOD蛋白在细胞中定位的分析 | 第33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第四章 耐高温SOD基因的克隆、原核表达与重组产物纯化 | 第35-52页 |
| 1 材料与试剂 | 第35-39页 |
| 1.1 材料 | 第35页 |
| 1.2 试剂 | 第35页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第35-39页 |
| 1.4 主要试剂盒 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-47页 |
| 2.1 原核重组质粒的构建 | 第39-44页 |
| 2.2 重组质粒pET-28a-SOD在BL21(DE3)中表达 | 第44-45页 |
| 2.3 重组蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| 2.4 BCA法蛋白定量 | 第46页 |
| 2.5 酶活测定 | 第46-47页 |
| 3 结果 | 第47-50页 |
| 3.1 PCR扩增目的片段 | 第47页 |
| 3.2 重组质粒pET-28a-SOD的双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3 重组蛋白的诱导表达 | 第48-49页 |
| 3.4 亲和层析纯化重组蛋白 | 第49页 |
| 3.5 调节温度法纯化重组蛋白 | 第49-50页 |
| 3.6 不同的蛋白样品浓度测定及酶活测定结果 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 原核表达纯化的耐高温SOD蛋白相关性质研究 | 第52-58页 |
| 1 材料与试剂 | 第52页 |
| 1.1 质粒 | 第52页 |
| 1.2 主要试剂 | 第52页 |
| 1.3 主要仪器 | 第52页 |
| 2 耐高温SOD蛋白的相关性质研究 | 第52-54页 |
| 2.1 SOD酶活检测 | 第52-53页 |
| 2.2 重组超氧化物歧化酶的最适反应温度 | 第53页 |
| 2.3 重组超氧化物歧化酶的热稳定性 | 第53页 |
| 2.4 pH对重组超氧化物歧化酶活性的影响 | 第53页 |
| 2.5 存放时间稳定性 | 第53-54页 |
| 2.6 紫外吸收光谱测定 | 第54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-56页 |
| 3.1 重组超氧化物歧化酶的最适温度 | 第54页 |
| 3.2 重组超氧化物歧化酶热稳定性 | 第54-55页 |
| 3.3 重组超氧化物歧化酶pH的稳定性 | 第55页 |
| 3.4 存放时间稳定性 | 第55-56页 |
| 3.5 紫外吸收光谱测定 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第六章 发酵生产耐高温超氧化物歧化酶的研究 | 第58-66页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| 1.1 菌株 | 第58页 |
| 1.2 培养基 | 第58页 |
| 1.3 试剂及试剂盒 | 第58页 |
| 1.4 主要仪器 | 第58-59页 |
| 2 实验方法 | 第59-61页 |
| 2.1 摇瓶种子培养 | 第59页 |
| 2.2 摇瓶发酵条件优化 | 第59-60页 |
| 2.3 高密度发酵生产耐高温SOD蛋白工艺 | 第60-61页 |
| 3 结果 | 第61-64页 |
| 3.1 诱导时机 | 第61页 |
| 3.2 诱导剂浓度 | 第61-62页 |
| 3.3 发酵诱导后表达时间 | 第62页 |
| 3.4 高密度发酵培养过程中菌液吸光度值的测定 | 第62-63页 |
| 3.5 发酵诱导表达SOD蛋白过程中菌液吸光度值的测定 | 第63页 |
| 3.6 分离纯化获得耐高温SOD蛋白 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 第七章 家蚕杆状病毒系统表达耐高温的超氧化物岐化酶 | 第66-80页 |
| 1 材料与试剂 | 第66-68页 |
| 1.1 载体、菌株、细胞、培养基 | 第66页 |
| 1.2 其他试剂 | 第66页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第66-67页 |
| 1.4 试剂盒 | 第67-68页 |
| 2 方法 | 第68-75页 |
| 2.1 构建重组pFastBacHTB载体 | 第68-69页 |
| 2.2 重组pFastBacHTB质粒与穿梭载体Bacmid同源重组 | 第69-71页 |
| 2.3 重组病毒vBmHis-SOD的构建 | 第71-73页 |
| 2.4 重组病毒在家蚕细胞中传代培养 | 第73页 |
| 2.5 目的蛋白在BmN细胞中的表达及鉴定 | 第73-74页 |
| 2.6 在家蚕杆状病毒细胞中表达目的蛋白以及目的蛋白的活性测定 | 第74-75页 |
| 3 结果 | 第75-78页 |
| 3.1 重组pFastBacHTB载体鉴定 | 第75页 |
| 3.2 提取重组Bacmid DNA | 第75-76页 |
| 3.3 重组Bacmid DNA鉴定 | 第76页 |
| 3.4 提取重组病毒并PCR鉴定 | 第76-77页 |
| 3.5 家蚕细胞中表达耐高温SOD蛋白的鉴定 | 第77-78页 |
| 3.6 家蚕细胞中表达耐高温SOD蛋白的活性鉴定 | 第78页 |
| 4 讨论 | 第78-80页 |
| 第八章 活体成像分析标记的重组SOD蛋白在小鼠体内的生物分布 | 第80-83页 |
| 1 材料与试剂 | 第80页 |
| 1.1 实验动物 | 第80页 |
| 1.2 主要试剂和耗材 | 第80页 |
| 2 方法 | 第80-81页 |
| 3 结果 | 第81-82页 |
| 4 讨论 | 第82-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
