| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 DIO3简介 | 第12页 |
| 1.2 DIO3的结构和功能 | 第12页 |
| 1.3 DIO3基因的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4 DNA甲基化 | 第13-20页 |
| 1.4.1 DNA甲基化的作用因素 | 第14-16页 |
| 1.4.2 哺乳动物DNA甲基化的特点 | 第16-17页 |
| 1.4.3 哺乳动物DNA甲基化主要的生物学作用 | 第17-18页 |
| 1.4.4 DNA甲基化的检测方法 | 第18-20页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器与试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.3 常用的生物信息学网站和分析软件 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 总RNA的提取及质量检测 | 第23-24页 |
| 2.2.2 cDNA的制备 | 第24页 |
| 2.2.3 基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.4 MassArray甲基化检测 | 第25-26页 |
| 2.3 克隆引物设计 | 第26-27页 |
| 2.4 DIO3基因的分离及克隆测序 | 第27-30页 |
| 2.4.1 RT-PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.4.2 PCR产物的纯化回收 | 第28-29页 |
| 2.4.3 RT-PCR产物的克隆 | 第29-30页 |
| 2.5 基因组织特异性表达分析 | 第30-31页 |
| 2.5.1 荧光定量特异性引物设计 | 第30页 |
| 2.5.2 实时荧光定量PCR | 第30-31页 |
| 2.6 DIO3 mRNA局部定位表达分析 | 第31-34页 |
| 2.6.1 mRNA原位杂交操作步骤 | 第32-34页 |
| 2.7 甲基化检测 | 第34-38页 |
| 2.7.1 甲基化引物设计 | 第34页 |
| 2.7.2 基因组DNA的重亚硫酸盐处理 | 第34-35页 |
| 2.7.3 甲基化PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.7.4 PCR产物酶切和RNaseA消化 | 第36-38页 |
| 2.7.5 产物树脂纯化 | 第38页 |
| 2.7.6 甲基化检测 | 第38页 |
| 2.8 统计分析 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-55页 |
| 3.1 总RNA质量检测 | 第38-39页 |
| 3.2 RT-PCR扩增结果 | 第39页 |
| 3.2.1 山羊DIO3基因测序结果 | 第39页 |
| 3.3 生物信息学分析 | 第39-44页 |
| 3.3.1 序列分析 | 第39-40页 |
| 3.3.2 系统进化树的构建 | 第40-41页 |
| 3.3.3 山羊DIO3蛋白二级结构的预测 | 第41-42页 |
| 3.3.4 DIO3蛋白3D结构模型预测 | 第42-44页 |
| 3.4 DIO3 mRNA组织特异性表达分析 | 第44-49页 |
| 3.4.1 实时荧光定量PCR引物验证 | 第44页 |
| 3.4.2 标准曲线的建立 | 第44-45页 |
| 3.4.3 荧光定量PCR扩增产物的特异性 | 第45-46页 |
| 3.4.4 山羊DIO3 mRNA的组织特异性表达差异 | 第46页 |
| 3.4.5 山羊DIO3 mRNA表达的发育性变化 | 第46-49页 |
| 3.5 DIO3 mRNA在大脑的定位表达分析 | 第49-51页 |
| 3.6 甲基化定量分析 | 第51-55页 |
| 3.6.1 基因组DNA的检测 | 第51页 |
| 3.6.2 DIO3基因内CpG岛的预测分析 | 第51-52页 |
| 3.6.3 甲基化结果检测 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 4.1 克隆的cDNA序列分析 | 第55-56页 |
| 4.2 DIO3蛋白功能和理化特性分析 | 第56页 |
| 4.3 DIO3 mRNA组织特异性表达分析 | 第56-57页 |
| 4.4 大脑不同区域的定位表达分析 | 第57-58页 |
| 4.5 不同组织基因组DNA甲基化分析 | 第58-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第66页 |