| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第10-30页 |
| 1.1 玉米雄性不育概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 植物雄性不育概念 | 第10页 |
| 1.1.2 玉米雄性不育分类 | 第10页 |
| 1.1.3 玉米雄性不育的特点意义 | 第10页 |
| 1.1.4 玉米雄性不育应用中的相关问题 | 第10-12页 |
| 1.2 利用生物技术手段创制植物雄性不育系的研究概况 | 第12-16页 |
| 1.2.1 利用细胞毒素基因的特异表达 | 第12-13页 |
| 1.2.2 利用反义RNA和RNA干扰技术获得雄性不育系 | 第13-14页 |
| 1.2.3 化学诱导雄性不育系统 | 第14页 |
| 1.2.4 SPT技术 | 第14-16页 |
| 1.2.5 其它雄性不育系统 | 第16页 |
| 1.3 花药(花粉)组织特异性启动子的研究 | 第16-18页 |
| 1.4 淀粉酶相关研究 | 第18-21页 |
| 1.4.1 淀粉酶基因来源的多样性 | 第18页 |
| 1.4.2 淀粉酶基因编码的淀粉酶功能的多样性 | 第18-19页 |
| 1.4.3 淀粉酶基因编码的淀粉酶功能区域的保守性 | 第19页 |
| 1.4.4 淀粉酶与花粉败育 | 第19-21页 |
| 1.5 玉米转基因研究现状 | 第21-29页 |
| 1.5.1 玉米转基因主要方法 | 第21-24页 |
| 1.5.1.1 农杆菌介导的遗传转化原理及过程 | 第21-22页 |
| 1.5.1.2 农杆菌介导遗传转化效率的影响因素 | 第22-24页 |
| 1.5.2 植物转基因中载体的选择 | 第24-26页 |
| 1.5.2.1 选择标记基因 | 第25页 |
| 1.5.2.2 报告基因 | 第25-26页 |
| 1.5.3 载体构建方法概述 | 第26-29页 |
| 1.5.3.1 酶切连接 | 第26页 |
| 1.5.3.2 利用T载体构建载体 | 第26页 |
| 1.5.3.3 Gateway技术 | 第26-27页 |
| 1.5.3.4 In-Fusion技术 | 第27-28页 |
| 1.5.3.5 利用重叠PCR法构建载体 | 第28-29页 |
| 1.6 目的意义 | 第29-30页 |
| 2 实验材料与方法 | 第30-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-33页 |
| 2.1.1 植株材料 | 第30页 |
| 2.1.2 质粒、菌株和载体 | 第30-31页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第31页 |
| 2.1.4 主要试剂盒名称及来源 | 第31页 |
| 2.1.5 主要试剂配制及培养基配方 | 第31-33页 |
| 2.1.5.1 主要试剂配制 | 第31-32页 |
| 2.1.5.2 培养基配制 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-43页 |
| 2.2.1 基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.2 总RNA的提取与cDNA的合成、检测 | 第34-36页 |
| 2.2.2.1 总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.2.2 cDNA的合成 | 第35页 |
| 2.2.2.3 cDNA的检测 | 第35-36页 |
| 2.2.3 质粒的提取 | 第36页 |
| 2.2.4 引物设计 | 第36-37页 |
| 2.2.5 PCR反应扩增目的片段 | 第37页 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第37-38页 |
| 2.2.7 目的条带回收 | 第38-39页 |
| 2.2.8 目的片段的克隆测序 | 第39-40页 |
| 2.2.8.1 CaCl2法制备感受态细胞 | 第39页 |
| 2.2.8.2 目的片段与克隆载体的连接 | 第39页 |
| 2.2.8.3 连接产物的转化 | 第39-40页 |
| 2.2.9 表达载体的构建 | 第40页 |
| 2.2.10 表达载体的酶切鉴定 | 第40页 |
| 2.2.11 表达载体转化根癌农杆菌 | 第40-41页 |
| 2.2.11.1 根癌农杆菌感受态的制备 | 第40-41页 |
| 2.2.11.2 目的载体转化根癌农杆菌 | 第41页 |
| 2.2.12 玉米受体材料的选择及幼胚愈伤组织的诱导 | 第41页 |
| 2.2.13 农杆菌介导愈伤组织的遗传转化 | 第41-42页 |
| 2.2.14 抗性愈伤的筛选及植株再生 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-50页 |
| 3.1 DNA、RNA的提取 | 第43页 |
| 3.2 cDNA的合成、检测 | 第43-44页 |
| 3.3 目的片段的扩增 | 第44-46页 |
| 3.4 淀粉酶花粉特异表达基因盒的构建 | 第46-48页 |
| 3.5 淀粉酶基因花粉特异表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 3.6 受体材料的制备及再生植株的获得、检测 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 4.1 利用TD-SOE-PCR技术进行多片段复杂载体的构建 | 第50-52页 |
| 4.2 α-淀粉酶基因调控花粉育性的优势分析 | 第52页 |
| 4.3 玉米植株转化内源基因的PCR检测问题 | 第52-53页 |
| 4.4 对实验不足之处的思考 | 第53-54页 |
| 5 参考文献 | 第54-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附件 | 第63-67页 |
