| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 导论 | 第11-16页 |
| 1.1 香蕉枯萎病及其原菌致病性研究概况 | 第11-12页 |
| 1.1.1 香蕉枯萎病的危害及香蕉发病症状 | 第11页 |
| 1.1.2 香蕉尖孢镰刀菌防治研究概况 | 第11-12页 |
| 1.2 真菌遗传转化研究方法 | 第12-13页 |
| 1.2.1 PEG-CaCl_2介导遗传转化 | 第12页 |
| 1.2.2 农杆菌介导遗传转化 | 第12-13页 |
| 1.2.3 电激介导遗传转化 | 第13页 |
| 1.2.4 转座子介导遗传转化 | 第13页 |
| 1.2.5 限制性内切酶介导遗传转化 | 第13页 |
| 1.3 尖孢镰刀菌致病相关基因研究 | 第13-14页 |
| 1.4 真菌fpd1基因的研究进展 | 第14页 |
| 1.5 尖孢镰刀菌fpd1基因研究背景 | 第14-15页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-37页 |
| 2.1 材料、试剂和仪器设备 | 第16-18页 |
| 2.1.1 材料 | 第16页 |
| 2.1.2 培养基及试剂 | 第16-18页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-37页 |
| 2.2.1 香蕉尖孢镰刀菌Foc4 fpd1基因生物学信息分析 | 第18页 |
| 2.2.2 基因组DNA提取(CTAB法) | 第18-19页 |
| 2.2.3 香蕉尖孢镰刀菌fpd1基因同源臂克隆 | 第19-22页 |
| 2.2.4 fpd1基因pCT74敲除载体构建 | 第22-26页 |
| 2.2.5 Foc4尖孢镰刀菌原生质体转化 | 第26-27页 |
| 2.2.6 转化子鉴定 | 第27-29页 |
| 2.2.7 香蕉尖孢镰刀菌fpd1基因敲除突变体表型观察 | 第29-30页 |
| 2.2.8 fpd1基因突变体致病力测定 | 第30-31页 |
| 2.2.9 fpd1基因突变体粗毒素测定分析 | 第31页 |
| 2.2.10 fpd1基因突变体细胞壁结构分析 | 第31-32页 |
| 2.2.11 fpd1基因突变体抗性分析 | 第32页 |
| 2.2.12 突变体与野生型菌株蛋白差异分析 | 第32-34页 |
| 2.2.13 Foc4 fpd1基因功能回复验证 | 第34-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-52页 |
| 3.1 香蕉尖孢镰刀菌目的基因生物信息学分析 | 第37-39页 |
| 3.1.1 fpd1基因编码蛋白理化性质分析 | 第37页 |
| 3.1.2 fpd1基因编码氨基酸磷酸化修饰的预测和分析 | 第37-38页 |
| 3.1.3 FPD1蛋白二级结构分析 | 第38页 |
| 3.1.4 FPD1蛋白跨膜结构及亚细胞定位预测 | 第38页 |
| 3.1.5 FPD1蛋白功能结构域分析 | 第38-39页 |
| 3.1.6 fpd1基因系统进化树构建分析 | 第39页 |
| 3.2 fpd1基因同源臂PCR扩增与pMD-18T重组质粒鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3 Foc4-fpd1-A-pCT74重组质粒酶切鉴定 | 第40页 |
| 3.4 Foc4-fpd1-A-pCT74-B敲除载体酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 3.5 香蕉枯萎病菌原生质体制备 | 第41页 |
| 3.6 转化子PCR与荧光显微镜鉴定 | 第41-42页 |
| 3.6.1 荧光显微镜鉴定转化子 | 第41-42页 |
| 3.6.2 转化子PCR鉴定 | 第42页 |
| 3.7 fpd1基因突变体菌株表型观察 | 第42-43页 |
| 3.7.1 突变体菌落形态观察 | 第42-43页 |
| 3.7.2 突变体与野生型生长速率和产孢量比较 | 第43页 |
| 3.8 不同碳源中Foc4突变体的生长观察 | 第43-44页 |
| 3.9 fpd1基因突变体致病力测定 | 第44-45页 |
| 3.9.1 盆栽致病性试验 | 第44页 |
| 3.9.2 孢子侵染香蕉苗根部分析 | 第44-45页 |
| 3.10 fpd1基因突变体粗毒素测定分析 | 第45页 |
| 3.11 fpd1基因突变体纤维素酶活力平板测定 | 第45-46页 |
| 3.12 突变体细胞壁结构分析 | 第46-47页 |
| 3.12.1 过氧化氢筛选试验 | 第46页 |
| 3.12.2 NaCl渗透压分析 | 第46-47页 |
| 3.12.3 不同因子对突变体和野生型生长影响 | 第47页 |
| 3.13 fpd1基因突变体对芽胞杆菌的抗性 | 第47-48页 |
| 3.14 fpd1基因突变体对农药抗药性 | 第48页 |
| 3.15 fpd1基因突变体与野生型菌株蛋白分析 | 第48-50页 |
| 3.15.1 突变体与野生型菌株分泌蛋白差异 | 第48-49页 |
| 3.15.2 突变体与野生型菌株细胞壁蛋白含量差异 | 第49页 |
| 3.15.3 fpd1基因突变体与野生型菌株蛋白含量试验 | 第49-50页 |
| 3.16 回复突变体 | 第50-52页 |
| 3.16.1 互补载体构建 | 第50-51页 |
| 3.16.2 回复突变体PCR鉴定 | 第51页 |
| 3.16.3 回复突变体功能验证 | 第51-52页 |
| 4 讨论与结论 | 第52-57页 |
| 4.1 香蕉尖孢镰刀菌fpd1基因生物信息学分析 | 第52页 |
| 4.2 香蕉尖孢镰刀菌fpd1基因敲除载体构建 | 第52-53页 |
| 4.3 制备原生质体和转化 | 第53页 |
| 4.4 香蕉枯萎病菌fpd1基因敲除突变体鉴定 | 第53页 |
| 4.5 fpd1基因缺失对尖孢镰刀菌表型影响 | 第53-54页 |
| 4.6 Foc4 fpd1基因缺失对香蕉致病力影响 | 第54页 |
| 4.7 香蕉枯萎病菌fpd1基因缺失对粗毒素的影响 | 第54-55页 |
| 4.8 fpd1基因对尖孢镰刀菌细胞壁的影响 | 第55页 |
| 4.9 香蕉枯萎病菌fpd1基因缺失对蛋白的影响 | 第55页 |
| 4.10 香蕉枯萎病菌fpd1基因缺失抗性试验 | 第55-56页 |
| 4.11 香蕉枯萎病fpd1基因敲除突变体回复实验 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
