| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-43页 |
| 1 稻瘟病菌概述 | 第16-20页 |
| 1.1 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第16-17页 |
| 1.2 稻瘟病菌的生活史和侵染循环 | 第17-20页 |
| 2 稻瘟病菌分子致病机制的研究进展 | 第20-27页 |
| 2.1 稻瘟病菌致病相关信号途径 | 第20-26页 |
| 2.2 细胞自噬与稻瘟病菌 | 第26-27页 |
| 3 精氨酸的研究进展 | 第27-35页 |
| 3.1 精氨酸的理化性质 | 第27-28页 |
| 3.2 精氨酸的功能及应用 | 第28-30页 |
| 3.3 精氨酸的合成途径 | 第30页 |
| 3.4 植物病原菌氨基酸合成相关基因功能的研究进展 | 第30-32页 |
| 3.5 NO的功能及其产生机制的研究进展 | 第32-35页 |
| 4 代谢组学的研究进展 | 第35-42页 |
| 4.1 代谢组学的概述 | 第35-36页 |
| 4.2 代谢组学的研究方法 | 第36-39页 |
| 4.3 代谢组学在微生物等领域的应用 | 第39-42页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第42-43页 |
| 第二章 材料与方法 | 第43-60页 |
| 1 供试菌株、质粒载体与寄主品种 | 第43页 |
| 1.1 供试菌株 | 第43页 |
| 1.2 质粒载体 | 第43页 |
| 1.3 感病寄主品种 | 第43页 |
| 2 工具酶、培养基及抗生素 | 第43-46页 |
| 2.1 分子生物学试剂、试剂盒及来源 | 第43页 |
| 2.2 培养基及组成成份 | 第43-45页 |
| 2.3 试验用抗生素及其浓度 | 第45-46页 |
| 3 分子生物学常规实验操作 | 第46-57页 |
| 3.1 PCR相关反应 | 第46页 |
| 3.1.1 普通PCR反应 | 第46页 |
| 3.1.2 菌落PCR反应 | 第46页 |
| 3.1.3 PCR反应程序 | 第46页 |
| 3.1.4 PCR产物纯化 | 第46页 |
| 3.2 核酸电泳 | 第46-47页 |
| 3.2.1 DNA电泳 | 第47页 |
| 3.2.2 RNA电泳 | 第47页 |
| 3.3 DNA提取、酶切、回收及连接 | 第47-50页 |
| 3.3.1 质粒DNA小量提取 | 第47页 |
| 3.3.2 质粒DNA大量抽提 | 第47-48页 |
| 3.3.3 稻瘟病菌基因组DNA小量快速提取 | 第48-49页 |
| 3.3.4 稻瘟病菌基因组DNA大量抽提 | 第49页 |
| 3.3.5 DNA酶切反应 | 第49-50页 |
| 3.3.6 DNA凝胶回收 | 第50页 |
| 3.3.7 酶切DNA片段的去磷酸化反应和连接反应 | 第50页 |
| 3.4 RNA提取及qRT-PCR | 第50-52页 |
| 3.4.1 稻瘟病菌总RNA提取(Trizol法) | 第50-51页 |
| 3.4.2 第一链cDNA合成 | 第51-52页 |
| 3.4.3 qRT-PCR反应 | 第52页 |
| 3.5 DNA克隆转化 | 第52-53页 |
| 3.5.1 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第52-53页 |
| 3.6 稻瘟病菌ATMT转化 | 第53-55页 |
| 3.6.1 农杆菌的冻融法转化 | 第53-54页 |
| 3.6.2 农杆菌介导的稻瘟病菌转化 | 第54-55页 |
| 3.7 稻瘟病菌基因组DNA southern杂交 | 第55-57页 |
| 3.7.1 模板DNA探针标记及杂交液制备 | 第55页 |
| 3.7.2 基因组DNA的消化、电泳及变性 | 第55-56页 |
| 3.7.3 DNA转膜 | 第56页 |
| 3.7.4 杂交过程 | 第56-57页 |
| 3.7.5 免疫显色 | 第57页 |
| 4 稻瘟病菌生物学性状测定试验 | 第57-60页 |
| 4.1 稻瘟病菌菌落形态观察及生长速度测定 | 第57-58页 |
| 4.2 稻瘟病菌产孢量测定 | 第58页 |
| 4.3 稻瘟病菌分生孢子诱导及显微观察 | 第58页 |
| 4.4 孢子萌发率和附着胞形成率分析 | 第58页 |
| 4.5 大麦离体接种和水稻喷雾接种 | 第58-59页 |
| 4.6 大麦叶片侵染显微观察 | 第59页 |
| 4.7 水稻根部侵染试验 | 第59页 |
| 4.8 稻瘟病菌菌丝、分生孢子和附着胞的荧光标记观察 | 第59页 |
| 4.9 稻瘟菌有性生殖试验 | 第59-60页 |
| 第三章 稻瘟病菌精氨酸合成途径基因的功能分析 | 第60-101页 |
| 1 结果分析 | 第60-96页 |
| 1.1 稻瘟病菌精氨酸合成途径的鉴定与分析 | 第60-65页 |
| 1.2 稻瘟病菌MoARG1、MoARG5,6和MoARG7的敲除与互补 | 第65-67页 |
| 1.3 稻瘟病菌精氨酸合成基因敲除突变体的表型分析 | 第67-88页 |
| 1.3.1 突变体菌落形态观察及生长速率测定 | 第67-71页 |
| 1.3.2 瓜氨酸对稻瘟病菌Arg~-突变体生长的恢复作用 | 第71页 |
| 1.3.3 精氨酸合成基因敲除对稻瘟病菌产孢及孢子形态的影响 | 第71-75页 |
| 1.3.4 精氨酸合成阻断对分生孢子梗分化的影响 | 第75-76页 |
| 1.3.5 精氨酸合成基因缺失对孢子萌发及附着胞形成的影响 | 第76-78页 |
| 1.3.6 精氨酸合成对稻瘟病菌的致病性是必需的 | 第78-81页 |
| 1.3.7 Arg~-突变体附着胞穿透延迟、侵染生长严重减弱 | 第81-83页 |
| 1.3.8 MoARG1、MoARG5,6和MoARG7在附着胞形成阶段的表达分析 | 第83-85页 |
| 1.3.9 MoARG1、MoARG5,6和MoARG7的亚细胞定位 | 第85-86页 |
| 1.3.10 目标基因荧光信号在附着胞成熟过程中的动态变化 | 第86-87页 |
| 1.3.11 精氨酸合成对于稻瘟病菌的有性生殖是必需的 | 第87-88页 |
| 1.4 探究稻瘟病菌中精氨酸与NO产生的关系 | 第88-96页 |
| 1.4.1 稻瘟病菌中NO产生与检测 | 第88-90页 |
| 1.4.2 药剂处理(SNP及L-NAME)对Arg~-突变体和野生型的影响 | 第90-96页 |
| 2 小结与讨论 | 第96-101页 |
| 第四章 稻瘟病菌代谢组学的研究 | 第101-121页 |
| 1 研究内容及技术路线 | 第101-102页 |
| 2 稻瘟病菌代谢组学方法平台的建立 | 第102-108页 |
| 2.1 稻瘟病菌LC-MS代谢组学方法的创建与优化 | 第102-108页 |
| 2.1.1 样品制备 | 第102-103页 |
| 2.1.2 代谢物提取与检测 | 第103-104页 |
| 2.1.3 不同提取方法提取效果比较 | 第104-106页 |
| 2.1.4 色谱梯度洗脱程序参数进一步优化及方法重复性考查 | 第106-108页 |
| 2.2 稻瘟病菌GC-MS代谢组学方法的建立 | 第108页 |
| 3 稻瘟病菌菌丝LC-MS代谢组学的研究 | 第108-111页 |
| 3.1 仪器设备、化学试剂及菌丝样品 | 第108页 |
| 3.2 样品前处理及上机测定 | 第108-111页 |
| 3.3 测定结果与分析 | 第111页 |
| 4 稻瘟病菌菌丝GC-MS代谢组学的研究 | 第111-115页 |
| 4.1 仪器设备、化学试剂及菌丝样品 | 第111页 |
| 4.2 样品前处理及测定 | 第111-112页 |
| 4.3 测定结果与分析 | 第112-115页 |
| 5 稻瘟病菌孢子、附着胞GC-MS代谢组学的研究 | 第115-118页 |
| 5.1 仪器设备、化学试剂 | 第115页 |
| 5.2 样品前处理及测定 | 第115-116页 |
| 5.3 测定结果与分析 | 第116-118页 |
| 6 小结与讨论 | 第118-121页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第121-125页 |
| 1 主要结论 | 第121-123页 |
| 2 后续工作及展望 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-139页 |
| 附录 | 第139-140页 |
