| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 前言 | 第9-16页 |
| 一、丙型肝炎病毒基本特征 | 第9-13页 |
| 1.1 丙型肝炎病毒的生物学特征 | 第9页 |
| 1.2 丙型肝炎病毒的基因组 | 第9-12页 |
| 1.3 丙型肝炎病毒的生命周期 | 第12-13页 |
| 二、丙型肝炎治疗现状 | 第13-14页 |
| 三、HCV受体OCLN的研究进展 | 第14页 |
| 四、关于HIV gp41六螺旋束的研究进展 | 第14-16页 |
| 材料与方法 | 第16-34页 |
| 一、材料 | 第16-22页 |
| 1.1 细胞系 | 第16页 |
| 1.2 质粒 | 第16页 |
| 1.3 生化试剂 | 第16-18页 |
| 1.4 主要试剂盒 | 第18页 |
| 1.5 抗体 | 第18页 |
| 1.6 工具酶 | 第18页 |
| 1.7 菌株 | 第18页 |
| 1.8 耗材 | 第18-19页 |
| 1.9 溶液 | 第19-21页 |
| 1.10 主要仪器 | 第21页 |
| 1.11 数据处理和分析软件 | 第21-22页 |
| 二、方法 | 第22-34页 |
| 2.1 基因的克隆与质粒构建 | 第22-26页 |
| 2.1.1 引物设计 | 第22-23页 |
| 2.1.2 目的基因的扩增 | 第23-24页 |
| 2.1.3 PCR产物检测与回收 | 第24页 |
| 2.1.4 目的基因与载体的限制性酶切 | 第24-25页 |
| 2.1.5 目的基因与载体的连接 | 第25页 |
| 2.1.6 连接产物转化 | 第25页 |
| 2.1.7 克隆鉴定 | 第25页 |
| 2.1.8 双环构建目的基因插入方法 | 第25-26页 |
| 2.2 目的基因表达与纯化 | 第26-28页 |
| 2.2.1 蛋白表达条件的筛选 | 第26-27页 |
| 2.2.2 蛋白大量表达纯化 | 第27-28页 |
| 2.3 圆二色谱实验 | 第28页 |
| 2.4 细胞培养 | 第28页 |
| 2.5 细胞RNA提取 | 第28-29页 |
| 2.6 Jc1-Luc HCVcc的制备和活力检测 | 第29-30页 |
| 2.6.1 Jc1-Luc HCVcc的制备 | 第29页 |
| 2.6.2 Jc1-Luc HCVcc的感染和活力检测 | 第29-30页 |
| 2.7 JFH-1 HCVcc的制备和活力检测 | 第30-31页 |
| 2.7.1 JFH-1 HCVcc的制备 | 第30页 |
| 2.7.2 JFH-1 HCVcc的感染 | 第30页 |
| 2.7.3 JFH-1 HCVcc的活力检测 | 第30-31页 |
| 2.8 假病毒的制备和活力检测 | 第31页 |
| 2.8.1 假病毒的制备 | 第31页 |
| 2.8.2 HCV假病毒的感染和活力检测 | 第31页 |
| 2.9 Western blot检测蛋白质的表达 | 第31-32页 |
| 2.10 间接免疫荧光染色和激光共聚焦检测 | 第32页 |
| 2.11 荧光实时定量RT-PCR | 第32-34页 |
| 研究结果 | 第34-45页 |
| 一、重构蛋白的原核表达和纯化 | 第34-37页 |
| 1.1 6HV1蛋白骨架的构建 | 第34-35页 |
| 1.2 OCLN胞外环预测与重构 | 第35页 |
| 1.3 OCLN胞外环重构蛋白表达与纯化 | 第35-37页 |
| 二、重构蛋白抗病毒功能研究 | 第37-40页 |
| 2.1 Jc1 HCVcc系统筛选OCLN重构蛋白 | 第37页 |
| 2.2 重构蛋白D1ECL1S+D2ECL2生物物理学特征检测 | 第37-38页 |
| 2.3 重构蛋白D1ECL1S+D2ECL2抗病毒活性检测 | 第38-40页 |
| 2.3.1 重构蛋白D1ECL1S+D2ECL2对JFH1 HCVcc系统抗病毒活性检测 | 第38-40页 |
| 2.3.2 利用HCVpp系统对重构蛋白D1ECL1S+D2ECL2进行抗病毒活性检测 | 第40页 |
| 三、重构蛋白D1ECL1S+D2ECL2抗病毒机制研究 | 第40-43页 |
| 3.1 重构蛋白D1ECL1S+D2ECL2作用于HCV入侵阶段 | 第40-41页 |
| 3.2 重构蛋白D1ECL1S+D2ECL2对HCV的复制没有影响 | 第41-42页 |
| 3.3 重构蛋白D1ECL1S+D2ECL2作用于HCV入侵的结合阶段 | 第42-43页 |
| 四、重构蛋白D1CL1S+D2ECL2作用靶点验证 | 第43-45页 |
| 讨论 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 文献综述 | 第56-65页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 附录一 | 第65-67页 |
| 附录二 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 个人简历 | 第70页 |
