| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 课题来源及研究目的 | 第11页 |
| 1.1.1 课题来源 | 第11页 |
| 1.1.2 研究目的 | 第11页 |
| 1.2 课题背景 | 第11页 |
| 1.3 海冰细菌研究现状 | 第11-15页 |
| 1.3.1 海冰细菌 | 第11-12页 |
| 1.3.2 海冰细菌的低温适应性研究 | 第12-13页 |
| 1.3.3 南极微生物低温酶的研究 | 第13-15页 |
| 1.4 GST的研究进展 | 第15-21页 |
| 1.4.1 GSTs的催化机理 | 第15-16页 |
| 1.4.2 GSTs的分类和命名 | 第16-18页 |
| 1.4.3 GSTs的基本结构特征 | 第18-19页 |
| 1.4.4 GSTs的功能 | 第19-21页 |
| 1.4.5 GSTs基因的克隆 | 第21页 |
| 1.5 南极微生物与抗氧化酶系统的关系 | 第21-22页 |
| 1.6 课题主要研究的内容 | 第22-23页 |
| 第2章 含GST基因海冰细菌的筛选及分子鉴定 | 第23-31页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-26页 |
| 2.1.1 菌株来源 | 第23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23页 |
| 2.1.3 细菌的培养及菌体的收集 | 第23-24页 |
| 2.1.4 含GST基因海冰细菌的筛选 | 第24-25页 |
| 2.1.5 海冰细菌 16S rDNA基因序列的测定 | 第25-26页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第26-30页 |
| 2.2.1 细菌基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2 细菌的筛选结果 | 第27页 |
| 2.2.3 16S rDNA基因的克隆 | 第27-28页 |
| 2.2.4 16S rDNA基因序列和系统发育学分析 | 第28-30页 |
| 2.3 本章小结 | 第30-31页 |
| 第3章 海冰细菌GST基因克隆与表达载体构建 | 第31-41页 |
| 3.1 材料与方法 | 第31-35页 |
| 3.1.1 材料 | 第31页 |
| 3.1.2 培养基及主要的试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.3 GST基因PCR扩增及测序 | 第32-33页 |
| 3.1.4 生物信息学分析 | 第33页 |
| 3.1.5 GST基因重组表达载体的构建 | 第33-35页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第35-40页 |
| 3.2.1 PCR筛选阳性T-A克隆结果 | 第35-36页 |
| 3.2.2 GST基因的测序结果及分析 | 第36-38页 |
| 3.2.3 GST基因异源表达载体pET-GST的构建 | 第38-40页 |
| 3.3 本章小结 | 第40-41页 |
| 第4章 重组pET-GST表达纯化与酶学特性研究 | 第41-51页 |
| 4.1 材料与方法 | 第41-46页 |
| 4.1.1 诱导试剂 | 第41页 |
| 4.1.2 蛋白电泳所用溶液的配置 | 第41-42页 |
| 4.1.3 包涵体提取所用溶液和试剂 | 第42页 |
| 4.1.4 蛋白纯化主要的试剂溶液 | 第42页 |
| 4.1.5 GST重组蛋白的异源表达 | 第42-44页 |
| 4.1.6 GST酶学性质的研究 | 第44-46页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第46-50页 |
| 4.2.1 PsGST基因的异源表达 | 第46页 |
| 4.2.2 PsGST重组蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| 4.2.3 不同温度下PsGST酶的活力 | 第47-48页 |
| 4.2.4 pH对PsGST酶活力的影响 | 第48页 |
| 4.2.5 不同NaCl浓度下PsGST酶的活力 | 第48-49页 |
| 4.2.6 抑制剂和金属离子对PsGST酶活力影响结果 | 第49页 |
| 4.2.7 PsGST酶促反应动力学测定 | 第49-50页 |
| 4.3 本章小结 | 第50-51页 |
| 第5章 不同温度下Pseudoalteromonas sp.ANT506 的抗氧化酶系统 | 第51-60页 |
| 5.1 材料与方法 | 第51-53页 |
| 5.1.1 材料 | 第51页 |
| 5.1.2 温度对南极海冰细菌生长影响的测定 | 第51页 |
| 5.1.3 酶液的制备 | 第51-52页 |
| 5.1.4 蛋白质含量的测定 | 第52页 |
| 5.1.5 细胞质膜透性的测定 | 第52页 |
| 5.1.6 丙二醛含量的测定 | 第52页 |
| 5.1.7 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定 | 第52-53页 |
| 5.1.8 过氧化物酶（POD）活性的测定 | 第53页 |
| 5.1.9 过氧化氢酶(CAT)活性的测定 | 第53页 |
| 5.1.10 PsGST活性的测定 | 第53页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第53-59页 |
| 5.2.1 温度对海冰细菌生长影响 | 第53-54页 |
| 5.2.2 不同温度下培养的菌体细胞质膜透性 | 第54-55页 |
| 5.2.3 不同温度下菌体丙二醛的含量 | 第55-56页 |
| 5.2.4 不同温度下菌体超氧化物歧化酶的活性 | 第56页 |
| 5.2.5 不同温度下菌体过氧化物酶的活性 | 第56-57页 |
| 5.2.6 不同温度下菌体过氧化氢酶的活性 | 第57-58页 |
| 5.2.7 不同温度下菌体GST酶的活性 | 第58-59页 |
| 5.3 本章小结 | 第59-60页 |
| 第6章 重组pET-GST发酵培养基的优化 | 第60-65页 |
| 6.1 材料与方法 | 第60-62页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第60页 |
| 6.1.2 培养基及试剂 | 第60页 |
| 6.1.3 Plackett-Burman设计优化发酵培养基 | 第60-61页 |
| 6.1.4 菌种的活化 | 第61页 |
| 6.1.5 pET-GST重组菌株的发酵 | 第61-62页 |
| 6.2 结果与讨论 | 第62-63页 |
| 6.3 本章小结 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
