| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第12-30页 |
| 1.肿瘤标志物在肿瘤检测中的应用 | 第12-14页 |
| 1.1 肿瘤标志物 | 第12页 |
| 1.2 几种临床常见肿瘤标志物 | 第12-14页 |
| 2.一种重要的广谱型肿瘤标志物——p53 抗体 | 第14-22页 |
| 2.1 P53 的发现过程 | 第15页 |
| 2.2 p53 基因 | 第15页 |
| 2.3 P53 蛋白结构及临床意义 | 第15-17页 |
| 2.4 p53 抗体 | 第17-22页 |
| 3.噬菌体展示技术 | 第22-26页 |
| 3.1 丝状噬菌体的结构及生活周期 | 第22-23页 |
| 3.2 丝状噬菌体展示系统 | 第23页 |
| 3.3 噬菌体展示常用载体 | 第23-25页 |
| 3.4 噬菌体展示技术的优点 | 第25页 |
| 3.5 噬菌体展示技术的应用 | 第25-26页 |
| 4.血清 p53 抗体检测的研究意义 | 第26-30页 |
| 4.1 立题依据 | 第26-27页 |
| 4.2 研究内容和研究路线流程图 | 第27-29页 |
| 4.3 研究意义 | 第29-30页 |
| 第一章 体检人群血清 p53 抗体检测研究 | 第30-53页 |
| 1.实验材料 | 第30-33页 |
| 1.1 载体和菌种 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 1.3 主要仪器 | 第30页 |
| 1.4 缓冲液及主要试剂配制 | 第30-32页 |
| 1.5 培养基 | 第32页 |
| 1.6 人血清样品 | 第32-33页 |
| 2.实验方法 | 第33-35页 |
| 2.1 重组人 P53 蛋白的制备 | 第33页 |
| 2.2 Western blot 鉴定人重组 P53 蛋白抗原性 | 第33-34页 |
| 2.3 杂合噬菌体 SS-phage 的制备及免疫原性鉴定 | 第34页 |
| 2.4 血清 p53 抗体的 ELISA 检测 | 第34-35页 |
| 2.5 肿瘤标志物蛋白芯片检测 | 第35页 |
| 2.6 统计检验 | 第35页 |
| 3.实验结果 | 第35-48页 |
| 3.1 重组质粒 PQE40-p53 及 pfd88-SS 测序结果 | 第35-36页 |
| 3.2 重组人 P53 蛋白的制备及 Western Blot 分析 | 第36-37页 |
| 3.3 杂合噬菌体 SS-phage 的制备、纯化及 Western blot 分析 | 第37-38页 |
| 3.4 体检人群血清 p53 抗体检测结果 | 第38-48页 |
| 讨论 | 第48-52页 |
| 1. 研究对象的选择及质量控制 | 第48-49页 |
| 2. 实验结果分析 | 第49-50页 |
| 2.1 ELISA 实验 | 第49-50页 |
| 2.2 p53-ELISA, SS-phage-ELISA 及 SS-phage/p53-ELISA 对体检人群血清 p53 抗体的检测 | 第50页 |
| 3. 血清 p53 抗体与肿瘤早期发现的相关性 | 第50-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| 第二章 甲状腺癌患者及乳腺癌患者血清 p53 抗体检测研究 | 第53-86页 |
| 第一节 甲状腺癌患者血清 p53 抗体的检测研究 | 第53-70页 |
| 1.实验材料 | 第53-55页 |
| 1.1 菌种和质粒 | 第53页 |
| 1.2 分子生物学试剂 | 第53页 |
| 1.3 主要仪器 | 第53页 |
| 1.4 缓冲液及主要试剂配制 | 第53-54页 |
| 1.5 培养基 | 第54页 |
| 1.6 血清样本 | 第54-55页 |
| 2.实验方法 | 第55-60页 |
| 2.1 噬菌体载体 F388-55-SP 的构建 | 第55-57页 |
| 2.2 噬菌体 phage-SP 的制备 | 第57-58页 |
| 2.3 噬菌体 phage-SP 的 Western blot 分析 | 第58页 |
| 2.4 甲状腺癌患者血清血清 p53 抗体检测 | 第58页 |
| 2.5 甲状腺乳头状癌标本 P53 蛋白的免疫组化分析 | 第58-59页 |
| 2.6 基因 BRAF T1799A 检测 | 第59-60页 |
| 2.7 统计分析 | 第60页 |
| 3.实验结果 | 第60-66页 |
| 3.1 噬菌体载体 F388-55-SP 的构建 | 第60-61页 |
| 3.2 Western blot 分析噬菌体 phage-SP 及 SS-phage 的抗原性 | 第61-62页 |
| 3.3 甲状腺乳头状癌患者血清 p53 抗体检测 | 第62-63页 |
| 3.4 血清 p53 抗体与临床病理指标相关性分析 | 第63页 |
| 3.5 p53 抗体表达情况与部分甲状腺乳头状癌患者 P53 蛋白积累及 BRAF 突变相关性分析 | 第63-66页 |
| 讨论 | 第66-69页 |
| 1. P53 蛋白展示表位的选择 | 第66页 |
| 2. p53-ELISA、SS-phage-ELISA、phage-SP-ELISA 和 p53-SS-SP-ELISA 对 117 例甲状腺腺瘤及 187 甲状腺乳头状癌的检测 | 第66-67页 |
| 3. p53 抗体与临床指标相关性 | 第67-68页 |
| 4. BARF T1799A 突变与甲状腺乳头状癌相关性 | 第68-69页 |
| 小结 | 第69-70页 |
| 第二节 工程化双展示噬菌体应用于乳腺癌患者血清 p53 抗体检测研究 | 第70-86页 |
| 1.实验材料 | 第70-71页 |
| 1.1 菌种和质粒 | 第70页 |
| 1.2 分子生物学试剂 | 第70页 |
| 1.3 主要仪器 | 第70页 |
| 1.4 缓冲液及主要试剂配制 | 第70-71页 |
| 1.5 培养基 | 第71页 |
| 1.6 血清样本 | 第71页 |
| 2.实验方法 | 第71-77页 |
| 2.1 展示两个 P53 蛋白表位的双展示噬菌体载体构建 | 第71-74页 |
| 2.2 噬菌体 phage-SS、phage-SP、SS-phage-SP 及 SS-phage 的制备 | 第74-75页 |
| 2.3 SDS-PAGE 及 Western blot 分析 SS-phage-SP、phage-SS、phage-SP 及 SS-phage | 第75-76页 |
| 2.4 SS-phage-SP-ELISA、p53-ELISA、phage-SP-ELISA 及 SS-phage-ELISA 检测乳腺癌患者血清 p53 抗体方法的建立 | 第76页 |
| 2.5 统计分析 | 第76-77页 |
| 实验结果 | 第77-83页 |
| 1. 噬菌体载体 F388-55-SS 及 SS-F388-55-SP 的构建 | 第77-79页 |
| 2. SDS-PAGE 及 Western blot 分析 phage-SS、phage-SP、SS-phage-SP 及 SS-phage | 第79-80页 |
| 3. 透射电镜观察双展示噬菌体 SS-phage-SP | 第80-81页 |
| 4. 噬菌体 PIII 及 PVIII 展示系统检测血清 p53 抗体结果分析比较 | 第81-82页 |
| 5. 双展示噬菌体 SS-phage-SP 检测乳腺癌患者血清 p53 抗体的结果 | 第82-83页 |
| 讨论 | 第83-85页 |
| 1. 噬菌体 PIII 展示系统及 PVIII 展示系统检测结果分析比较 | 第83-84页 |
| 2. 双展示噬菌体 SS-phage-SP 检测结果分析 | 第84-85页 |
| 小结 | 第85-86页 |
| 本论文的主要结论和创新点 | 第86-87页 |
| 1.主要结论 | 第86页 |
| 2.创新点 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 在研期间公开发表的论文 | 第96-97页 |
| 在研期间参加的项目 | 第97页 |
