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S1PR1调控不同毒力新城疫病毒诱导炎症反应的机制研究

摘要第3-6页
ABSTRACT第6-9页
第1章 前言第17-34页
    1.1 研究背景第17-32页
        1.1.1 新城疫病毒概述第17-24页
        1.1.2 炎症反应与病毒致病的研究第24-25页
        1.1.3 树突细胞参与炎症反应的研究进展第25-27页
        1.1.4 1-磷酸鞘氨醇受体 1(S1PR1)概述第27-29页
        1.1.5 新城疫病毒感染与天然免疫反应的研究第29-30页
        1.1.6 病毒感染与NF-κB信号通路的研究进展第30-32页
    1.2 研究的目的和意义第32-34页
第2章 不同毒力新城疫病毒感染引起的鸡炎症反应及鸡S1PR1基因的表达第34-58页
    2.1 引言第34-35页
    2.2 实验材料第35-37页
        2.2.1 病毒株第35页
        2.2.2 菌株和质粒第35页
        2.2.3 细胞第35-36页
        2.2.4 鸡胚和试验动物第36页
        2.2.5 主要试剂第36页
        2.2.6 主要仪器设备第36-37页
    2.3 实验方法第37-48页
        2.3.1 病毒的蚀斑纯化第37-38页
        2.3.2 病毒生物学特性测定第38-39页
        2.3.3 病毒感染SPF鸡第39-40页
        2.3.4 感染鸡的炎症病理观察第40页
        2.3.5 荧光定量分析细胞因子及S1PR1的表达及组织分布第40-42页
        2.3.6 鸡S1PR1基因的克隆与序列分析第42-44页
        2.3.7 鸡S1PR1基因真核表达第44-48页
        2.3.8 统计分析第48页
    2.4 实验结果与分析第48-57页
        2.4.1 不同NDV毒株的蚀斑形成情况第48页
        2.4.2 NDV毒株的生物学特性第48-49页
        2.4.3 NDV毒株在细胞中的增殖第49-50页
        2.4.4 不同毒力NDV毒株引起鸡的病理变化第50-51页
        2.4.5 NDV在各组织中的分布第51-52页
        2.4.6 NDV感染诱导的鸡促炎性细胞因子IL-1β的表达第52-53页
        2.4.7 NDV感染引起的鸡S1PR1基因表达变化第53-54页
        2.4.8 鸡S1PR1基因的克隆第54-55页
        2.4.9 鸡S1PR1基因的真核表达第55-57页
    2.5 本章小结第57-58页
第3章 S1PR1参与调控NDV诱导的炎症反应第58-74页
    3.1 引言第58-59页
    3.2 实验材料第59-60页
        3.2.1 病毒株、细胞第59页
        3.2.2 主要试剂第59-60页
        3.2.3 主要仪器设备第60页
    3.3 实验方法第60-65页
        3.3.1 病毒感染DF-1 细胞第60页
        3.3.2 荧光定量PCR检测NDV诱导的细胞炎症反应第60-61页
        3.3.3 Western Blot检测NDV感染后细胞内S1PR1的表达水平第61-63页
        3.3.4 W146对DF-1 细胞中S1PR1基因的调控分析第63页
        3.3.5 S1PR1的过表达第63-64页
        3.3.6 ELISA方法检测炎性细胞因子的表达第64页
        3.3.7 病毒增殖曲线测定第64页
        3.3.8 细胞活力检测第64-65页
    3.4 实验结果第65-72页
        3.4.1 强、弱NDV毒株诱导DF-1 细胞因子的基因转录第65-66页
        3.4.2 NDV毒株感染引起鸡S1PR1的蛋白表达第66-67页
        3.4.3 W146对鸡S1PR1抑制效果的检测第67页
        3.4.4 W146对细胞增殖与活力的影响第67-68页
        3.4.5 W146对NDV诱导的细胞炎症反应的影响第68-69页
        3.4.6 W146对NDV增殖的影响第69-70页
        3.4.7 过表达S1PR1对NDV诱导的细胞炎症反应的影响第70-72页
        3.4.8 过表达S1PR1基因对NDV增殖的影响第72页
    3.5 本章小结第72-74页
第4章 S1PR1调控新城疫病毒感染引起炎性反应的信号通路研究第74-85页
    4.1 引言第74-75页
    4.2 实验材料第75-76页
        4.2.1 病毒株、细胞第75页
        4.2.2 质粒第75页
        4.2.3 主要试剂第75-76页
        4.2.4 主要仪器设备第76页
    4.3 试验方法第76-78页
        4.3.1 荧光定量PCR检测NDV诱导的NF-κB基因表达第76页
        4.3.2 荧光素酶试验第76-77页
        4.3.3 激光共聚焦检测Rel A/p65的核移位第77页
        4.3.4 Western Blot检测Rel A/p65的表达第77-78页
    4.4 结果与分析第78-84页
        4.4.1 NDV诱导NF-κB转录第78页
        4.4.2 荧光素酶检测NF-κB Rel A/p65的基因表达第78-79页
        4.4.3 Western Blot检测Rel A/p65的表达第79-80页
        4.4.4 激光共聚焦检测GM引起的Rel A/p65的核移位第80-81页
        4.4.5 荧光定量PCR检测S1PR1对NF-κB基因表达的影响第81页
        4.4.6 荧光素酶检测S1PR1对NF-κB基因表达的影响第81-82页
        4.4.7 Western Blot检测S1PR1对Rel A/p65蛋白表达的影响第82-83页
        4.4.8 激光共聚焦检测S1PR1对Rel A/p65的核移位的影响第83-84页
    4.5 本章小结第84-85页
第5章 不同毒力新城疫病毒诱导的鸡DC细胞炎症反应第85-96页
    5.1 引言第85页
    5.2 实验材料第85-86页
        5.2.1 病毒株、细胞第85页
        5.2.2 主要试剂第85-86页
        5.2.3 主要仪器设备第86页
    5.3 试验方法第86-88页
        5.3.1 鸡骨髓源树突状细胞的制作第86-87页
        5.3.2 鸡骨髓源分化细胞的鉴定第87页
        5.3.3 荧光定量PCR检测NDV诱导的鸡DC细胞炎症反应第87-88页
    5.4 实验结果第88-94页
        5.4.1 鸡骨髓源树突状细胞培养及形态观察第88-89页
        5.4.2 鸡骨髓源树突状细胞的流式鉴定第89-91页
        5.4.3 强、弱NDV毒株感染DC及增殖情况第91-92页
        5.4.4 强、弱NDV毒株诱导DC的细胞因子转录第92-94页
        5.4.5 强、弱NDV毒株感染引起鸡S1PR1基因的表达第94页
    5.5 本章小结第94-96页
第6章 全文讨论与总结第96-104页
    6.1 全文讨论第96-103页
        6.1.1 第二章讨论第96-97页
        6.1.2 第三章讨论第97-100页
        6.1.3 第四章讨论第100-101页
        6.1.4 第五章讨论第101-103页
    6.2 全文总结第103页
    6.3 论文创新点第103-104页
致谢第104-106页
参考文献第106-117页
附录:发表文章及参加的相关学术会议第117-118页
    发表文章第117-118页
    参加的相关学术会议第118页

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