摘要 | 第3-6页 |
ABSTRACT | 第6-9页 |
第1章 前言 | 第17-34页 |
1.1 研究背景 | 第17-32页 |
1.1.1 新城疫病毒概述 | 第17-24页 |
1.1.2 炎症反应与病毒致病的研究 | 第24-25页 |
1.1.3 树突细胞参与炎症反应的研究进展 | 第25-27页 |
1.1.4 1-磷酸鞘氨醇受体 1(S1PR1)概述 | 第27-29页 |
1.1.5 新城疫病毒感染与天然免疫反应的研究 | 第29-30页 |
1.1.6 病毒感染与NF-κB信号通路的研究进展 | 第30-32页 |
1.2 研究的目的和意义 | 第32-34页 |
第2章 不同毒力新城疫病毒感染引起的鸡炎症反应及鸡S1PR1基因的表达 | 第34-58页 |
2.1 引言 | 第34-35页 |
2.2 实验材料 | 第35-37页 |
2.2.1 病毒株 | 第35页 |
2.2.2 菌株和质粒 | 第35页 |
2.2.3 细胞 | 第35-36页 |
2.2.4 鸡胚和试验动物 | 第36页 |
2.2.5 主要试剂 | 第36页 |
2.2.6 主要仪器设备 | 第36-37页 |
2.3 实验方法 | 第37-48页 |
2.3.1 病毒的蚀斑纯化 | 第37-38页 |
2.3.2 病毒生物学特性测定 | 第38-39页 |
2.3.3 病毒感染SPF鸡 | 第39-40页 |
2.3.4 感染鸡的炎症病理观察 | 第40页 |
2.3.5 荧光定量分析细胞因子及S1PR1的表达及组织分布 | 第40-42页 |
2.3.6 鸡S1PR1基因的克隆与序列分析 | 第42-44页 |
2.3.7 鸡S1PR1基因真核表达 | 第44-48页 |
2.3.8 统计分析 | 第48页 |
2.4 实验结果与分析 | 第48-57页 |
2.4.1 不同NDV毒株的蚀斑形成情况 | 第48页 |
2.4.2 NDV毒株的生物学特性 | 第48-49页 |
2.4.3 NDV毒株在细胞中的增殖 | 第49-50页 |
2.4.4 不同毒力NDV毒株引起鸡的病理变化 | 第50-51页 |
2.4.5 NDV在各组织中的分布 | 第51-52页 |
2.4.6 NDV感染诱导的鸡促炎性细胞因子IL-1β的表达 | 第52-53页 |
2.4.7 NDV感染引起的鸡S1PR1基因表达变化 | 第53-54页 |
2.4.8 鸡S1PR1基因的克隆 | 第54-55页 |
2.4.9 鸡S1PR1基因的真核表达 | 第55-57页 |
2.5 本章小结 | 第57-58页 |
第3章 S1PR1参与调控NDV诱导的炎症反应 | 第58-74页 |
3.1 引言 | 第58-59页 |
3.2 实验材料 | 第59-60页 |
3.2.1 病毒株、细胞 | 第59页 |
3.2.2 主要试剂 | 第59-60页 |
3.2.3 主要仪器设备 | 第60页 |
3.3 实验方法 | 第60-65页 |
3.3.1 病毒感染DF-1 细胞 | 第60页 |
3.3.2 荧光定量PCR检测NDV诱导的细胞炎症反应 | 第60-61页 |
3.3.3 Western Blot检测NDV感染后细胞内S1PR1的表达水平 | 第61-63页 |
3.3.4 W146对DF-1 细胞中S1PR1基因的调控分析 | 第63页 |
3.3.5 S1PR1的过表达 | 第63-64页 |
3.3.6 ELISA方法检测炎性细胞因子的表达 | 第64页 |
3.3.7 病毒增殖曲线测定 | 第64页 |
3.3.8 细胞活力检测 | 第64-65页 |
3.4 实验结果 | 第65-72页 |
3.4.1 强、弱NDV毒株诱导DF-1 细胞因子的基因转录 | 第65-66页 |
3.4.2 NDV毒株感染引起鸡S1PR1的蛋白表达 | 第66-67页 |
3.4.3 W146对鸡S1PR1抑制效果的检测 | 第67页 |
3.4.4 W146对细胞增殖与活力的影响 | 第67-68页 |
3.4.5 W146对NDV诱导的细胞炎症反应的影响 | 第68-69页 |
3.4.6 W146对NDV增殖的影响 | 第69-70页 |
3.4.7 过表达S1PR1对NDV诱导的细胞炎症反应的影响 | 第70-72页 |
3.4.8 过表达S1PR1基因对NDV增殖的影响 | 第72页 |
3.5 本章小结 | 第72-74页 |
第4章 S1PR1调控新城疫病毒感染引起炎性反应的信号通路研究 | 第74-85页 |
4.1 引言 | 第74-75页 |
4.2 实验材料 | 第75-76页 |
4.2.1 病毒株、细胞 | 第75页 |
4.2.2 质粒 | 第75页 |
4.2.3 主要试剂 | 第75-76页 |
4.2.4 主要仪器设备 | 第76页 |
4.3 试验方法 | 第76-78页 |
4.3.1 荧光定量PCR检测NDV诱导的NF-κB基因表达 | 第76页 |
4.3.2 荧光素酶试验 | 第76-77页 |
4.3.3 激光共聚焦检测Rel A/p65的核移位 | 第77页 |
4.3.4 Western Blot检测Rel A/p65的表达 | 第77-78页 |
4.4 结果与分析 | 第78-84页 |
4.4.1 NDV诱导NF-κB转录 | 第78页 |
4.4.2 荧光素酶检测NF-κB Rel A/p65的基因表达 | 第78-79页 |
4.4.3 Western Blot检测Rel A/p65的表达 | 第79-80页 |
4.4.4 激光共聚焦检测GM引起的Rel A/p65的核移位 | 第80-81页 |
4.4.5 荧光定量PCR检测S1PR1对NF-κB基因表达的影响 | 第81页 |
4.4.6 荧光素酶检测S1PR1对NF-κB基因表达的影响 | 第81-82页 |
4.4.7 Western Blot检测S1PR1对Rel A/p65蛋白表达的影响 | 第82-83页 |
4.4.8 激光共聚焦检测S1PR1对Rel A/p65的核移位的影响 | 第83-84页 |
4.5 本章小结 | 第84-85页 |
第5章 不同毒力新城疫病毒诱导的鸡DC细胞炎症反应 | 第85-96页 |
5.1 引言 | 第85页 |
5.2 实验材料 | 第85-86页 |
5.2.1 病毒株、细胞 | 第85页 |
5.2.2 主要试剂 | 第85-86页 |
5.2.3 主要仪器设备 | 第86页 |
5.3 试验方法 | 第86-88页 |
5.3.1 鸡骨髓源树突状细胞的制作 | 第86-87页 |
5.3.2 鸡骨髓源分化细胞的鉴定 | 第87页 |
5.3.3 荧光定量PCR检测NDV诱导的鸡DC细胞炎症反应 | 第87-88页 |
5.4 实验结果 | 第88-94页 |
5.4.1 鸡骨髓源树突状细胞培养及形态观察 | 第88-89页 |
5.4.2 鸡骨髓源树突状细胞的流式鉴定 | 第89-91页 |
5.4.3 强、弱NDV毒株感染DC及增殖情况 | 第91-92页 |
5.4.4 强、弱NDV毒株诱导DC的细胞因子转录 | 第92-94页 |
5.4.5 强、弱NDV毒株感染引起鸡S1PR1基因的表达 | 第94页 |
5.5 本章小结 | 第94-96页 |
第6章 全文讨论与总结 | 第96-104页 |
6.1 全文讨论 | 第96-103页 |
6.1.1 第二章讨论 | 第96-97页 |
6.1.2 第三章讨论 | 第97-100页 |
6.1.3 第四章讨论 | 第100-101页 |
6.1.4 第五章讨论 | 第101-103页 |
6.2 全文总结 | 第103页 |
6.3 论文创新点 | 第103-104页 |
致谢 | 第104-106页 |
参考文献 | 第106-117页 |
附录:发表文章及参加的相关学术会议 | 第117-118页 |
发表文章 | 第117-118页 |
参加的相关学术会议 | 第118页 |