| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第12-26页 |
| 1.1 气单胞菌及其引起的疾病 | 第12-15页 |
| 1.1.1 嗜水气单胞菌 | 第13页 |
| 1.1.2 温和气单胞菌 | 第13-14页 |
| 1.1.3 杀鲑气单胞菌 | 第14页 |
| 1.1.4 豚鼠气单胞菌 | 第14页 |
| 1.1.5 维氏气单胞菌 | 第14-15页 |
| 1.2 气单胞菌鉴定方法 | 第15-21页 |
| 1.2.1 传统鉴定方法 | 第15-17页 |
| 1.2.2 分子生物学鉴定方法 | 第17-21页 |
| 1.2.3 免疫学检测方法 | 第21页 |
| 1.3 毒力基因 | 第21-23页 |
| 1.3.1 气溶素 | 第21-22页 |
| 1.3.2 溶血素 | 第22页 |
| 1.3.3 丝氨酸蛋白酶 | 第22页 |
| 1.3.4 外膜蛋白 | 第22-23页 |
| 1.3.5 肠毒素 | 第23页 |
| 1.4 气单胞菌的生态分布与水产动物疾病 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究的意义 | 第24-26页 |
| 2 16SrRNA-PFLP方法检测池塘环境的气单胞菌 | 第26-40页 |
| 2.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 样品来源 | 第26页 |
| 2.1.2 培养基及试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 仪器 | 第27页 |
| 2.2 方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 样品处理 | 第27页 |
| 2.2.2 细菌分离、纯化 | 第27页 |
| 2.2.3 细菌保存 | 第27-28页 |
| 2.2.4 氧化酶测试 | 第28页 |
| 2.2.5 葡萄糖氧化发酵实验 | 第28-29页 |
| 2.2.7 气单胞菌gyrB基因检测 | 第29页 |
| 2.2.8 16SrRNA-RFLP分析 | 第29-30页 |
| 2.2.9 序列测定及结果分析 | 第30页 |
| 2.3 结果 | 第30-37页 |
| 2.3.1 细菌分离 | 第30-31页 |
| 2.3.2 生化鉴定 | 第31页 |
| 2.3.3 特异性引物鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.4 酶切鉴定 | 第32-34页 |
| 2.3.5 序列测定与系统进化分析 | 第34-37页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第37-40页 |
| 2.4.1 气单胞菌的鉴别方法 | 第37页 |
| 2.4.2 池塘环境中气单胞菌的分布 | 第37-40页 |
| 3 三重PCR检测嗜水气单胞菌方法的建立 | 第40-46页 |
| 3.1 材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 菌株 | 第40页 |
| 3.1.2 试剂及仪器 | 第40-41页 |
| 3.2 方法 | 第41-42页 |
| 3.2.1 细菌培养及基因组DNA提取 | 第41页 |
| 3.2.2 引物设计 | 第41页 |
| 3.2.3 多重PCR反应体系的建立 | 第41页 |
| 3.2.4 多重PCR特异性试验 | 第41-42页 |
| 3.2.5 多重PCR灵敏度试验 | 第42页 |
| 3.2.6 临床分离株的检测 | 第42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-44页 |
| 3.3.1 三重PCR方法的建立 | 第42页 |
| 3.3.2 方法的特异性 | 第42-43页 |
| 3.3.3 方法的灵敏性 | 第43-44页 |
| 3.3.4 环境菌株的检测 | 第44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 3.4.1 气单胞菌类疾病及其诊断 | 第44-45页 |
| 3.4.2 本实验多重PCR鉴定方法的探讨 | 第45-46页 |
| 4 维氏气单胞菌分离株的ERIC基因分型及毒力基因检测 | 第46-58页 |
| 4.1 材料 | 第46页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第46页 |
| 4.1.2 仪器设备及试剂 | 第46页 |
| 4.2 方法 | 第46-49页 |
| 4.2.1 菌株的活化 | 第46-47页 |
| 4.2.2 DNA模板的制备 | 第47页 |
| 4.2.3 ERIC基因扩增 | 第47页 |
| 4.2.4 核酸电泳 | 第47页 |
| 4.2.5 聚类分析 | 第47-48页 |
| 4.2.6 毒力基因检测 | 第48页 |
| 4.2.7 PCR产物电泳检测 | 第48-49页 |
| 4.3 结果 | 第49-55页 |
| 4.3.1 ERIC-PCR | 第49-52页 |
| 4.3.2 毒力基因扩增 | 第52-55页 |
| 4.4 分析与讨论 | 第55-58页 |
| 4.4.1 维氏气单胞菌ERIC分型 | 第55-56页 |
| 4.4.2 维氏气单胞菌毒力基因检测 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 攻读学位期间的科研成果 | 第72-73页 |