中文摘要 | 第4-9页 |
ABSTRACT | 第9-15页 |
英文缩略表 | 第20-22页 |
内容提要 | 第22-23页 |
第1章 文献综述 | 第23-33页 |
1.1 肿瘤与辐射抗性 | 第23-24页 |
1.1.1 肺癌与放疗 | 第23页 |
1.1.2 肿瘤细胞的辐射抗性 | 第23-24页 |
1.2 NRP1 | 第24-26页 |
1.2.1 NRP1的生物学特点 | 第24页 |
1.2.2 NRP1与肿瘤 | 第24-26页 |
1.2.3 NRP1与辐射抗性 | 第26页 |
1.3 三维培养 | 第26-27页 |
1.4 肿瘤微环境 | 第27-32页 |
1.4.1 肿瘤炎性微环境 | 第28-29页 |
1.4.2 肿瘤迁移微环境 | 第29-31页 |
1.4.3 肿瘤微环境与辐射抗性 | 第31-32页 |
1.5 立题依据 | 第32-33页 |
第2章 材料与方法 | 第33-48页 |
2.1 主要器材与仪器 | 第33-34页 |
2.1.1 实验器材 | 第33页 |
2.1.2 实验仪器 | 第33-34页 |
2.2 主要试剂 | 第34-36页 |
2.3 试剂的配制 | 第36-38页 |
2.3.1 细胞培养相关试剂的配制 | 第36-37页 |
2.3.2 Western blot实验相关试剂的配制 | 第37-38页 |
2.3.3 免疫荧光实验相关试剂的配制 | 第38页 |
2.4 细胞培养 | 第38-39页 |
2.5 照射条件 | 第39页 |
2.6 细胞模型的构建 | 第39-40页 |
2.6.1 辐射抗性细胞模型 | 第39页 |
2.6.2 NRP1干扰的A549细胞模型 | 第39-40页 |
2.6.3 二维共培养体系的建立 | 第40页 |
2.6.4 三维细胞共培养模型的建立 | 第40页 |
2.7 转录水平检测 | 第40-43页 |
2.7.1 总RNA的提取 | 第40-41页 |
2.7.2 逆转录反应 | 第41-42页 |
2.7.3 Real-time PCR引物的设计与合成 | 第42页 |
2.7.4 Real-Time PCR反应 | 第42-43页 |
2.8 蛋白表达水平检测 | 第43-45页 |
2.8.1 总蛋白的提取 | 第43页 |
2.8.2 蛋白浓度的测定 | 第43页 |
2.8.3 蛋白样品的处理 | 第43页 |
2.8.4 Western Blot步骤 | 第43-44页 |
2.8.5 ELISA法 | 第44-45页 |
2.8.6 共刺激分子的流式细胞术检测 | 第45页 |
2.9 免疫组化检测 | 第45-46页 |
2.9.1 鬼笔环肽染色法 | 第45页 |
2.9.2 免疫荧光染色法 | 第45-46页 |
2.10 流式液相多重蛋白定量检测(CYTOMETRIC BEAD ARRAY,CBA) | 第46页 |
2.11 Transwell法 | 第46-47页 |
2.12 统计学分析 | 第47-48页 |
第3章 实验结果 | 第48-62页 |
3.1 NRP1表达不同的细胞模型鉴定 | 第48-49页 |
3.1.1 辐射抗性细胞模型A549-RR的建立及鉴定 | 第48页 |
3.1.2 NRP1Low-A549细胞模型的鉴定 | 第48-49页 |
3.2 三维培养对细胞表型及功能的影响 | 第49-52页 |
3.2.1 A549细胞三维培养体系的建立和表观形态学的观察 | 第49-50页 |
3.2.2 三维培养对细胞骨架蛋白的影响 | 第50-51页 |
3.2.3 三维培养对细胞功能的影响 | 第51-52页 |
3.3 细胞共培养体系的建立 | 第52-54页 |
3.3.1 细胞二维、三维共培养模型的建立 | 第52-53页 |
3.3.2 在共培养体系中时间-效应关系的确定 | 第53-54页 |
3.4 肿瘤炎性微环境对NRP1诱导辐射抗性的作用及分子机制 | 第54-56页 |
3.4.1 肿瘤炎性微环境对NRP1诱导肺癌细胞辐射抗性的作用 | 第54-55页 |
3.4.2 电离辐射对肿瘤炎性微环境中Treg细胞分化及功能的影响 | 第55-56页 |
3.5 肿瘤迁移微环境 | 第56-62页 |
3.5.1 肿瘤迁移微环境对NRP1诱导肺癌细胞辐射抗性的作用 | 第56-57页 |
3.5.2 肿瘤迁移微环境中NRP1对肿瘤迁移微环境中相关因子分泌的影响 | 第57-59页 |
3.5.3 肿瘤迁移微环境中成纤维细胞的CAFs的转化 | 第59-60页 |
3.5.4 肿瘤迁移微环境中NRP1对A549细胞迁移能力的影响 | 第60-62页 |
第4章 讨论 | 第62-70页 |
4.1 NRP1诱导肺腺癌A549细胞的辐射抗性 | 第62-63页 |
4.2 三维培养对A549细胞形态学及细胞功能的影响 | 第63-64页 |
4.3 用三维共培养技术构建肿瘤微环境 | 第64-65页 |
4.4 肿瘤炎性微环境与NRP1对肺癌细胞辐射抗性的影响 | 第65-67页 |
4.5 肿瘤迁移微环境与NRP1诱导肺癌细胞辐射抗性的影响 | 第67-70页 |
第5章 结论 | 第70-71页 |
参考文献 | 第71-77页 |
作者简介 | 第77-79页 |
致谢 | 第79页 |