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文蛤弧菌抗性相关标记/基因的确定及遗传互作效应分析

致谢第4-6页
摘要第6-8页
Abstract第8-10页
第一章 综述第17-47页
    1.文蛤生物学第17-21页
        1.1 分类地位及经济价值第17页
        1.2 我国文蛤养殖现状及存在的问题第17-18页
        1.3 免疫防御系统第18-21页
            1.3.1 细胞免疫第19-20页
            1.3.2 体液免疫第20-21页
            1.3.3 化学递质第21页
    2.贝类抗性育种第21-26页
        2.1 概述第21-22页
        2.2 主要的抗性育种方法第22-25页
            2.2.1 选择育种第22-23页
            2.2.2 杂交育种第23-24页
            2.2.3 家系选育第24页
            2.2.4 分子标记辅助选育第24-25页
        2.3 问题与展望第25-26页
    3.分子标记第26-38页
        3.1 微卫星标记第26-30页
            3.1.1 微卫星概述第26-29页
            3.1.2 微卫星的开发与检测第29-30页
        3.2 SNP标记第30-38页
            3.2.1 SNP标记概述第30-31页
            3.2.2 SNP标记的开发第31-33页
            3.2.3 SNP标记的分型第33-38页
                3.2.3.0 直接杂交第33-34页
                3.2.3.1 限制性内切酶酶切第34页
                3.2.3.2 单链DNA构象和异源双链第34-35页
                3.2.3.3 引物延伸第35-36页
                3.2.3.4 寡核苷酸连接反应第36页
                3.2.3.5 焦磷酸测序第36-37页
                3.2.3.6 核酸外切酶检测第37页
                3.2.3.7 熔解曲线第37-38页
                3.2.3.8 直接测序第38页
    4.标记-性状关联分析第38-41页
        4.1 概述第38-39页
        4.2 常用统计学方法第39-41页
            4.2.1 卡方检验(Chi-square test)第39页
            4.2.2 逻辑回归(Logitic regression)第39-40页
            4.2.3 多因子降维(Multifactor dimensionality reduction)第40-41页
    5.碱性螺旋-环-螺旋(HLH)转录因子超家族第41-45页
        5.1 多毛蛋白(Hairy)第43-44页
        5.2 DNA分化抑制因子 2(Id2)第44-45页
    6.研究目的与意义第45-47页
第二章 文蛤弧菌抗性相关微卫星标记的开发及鉴定第47-66页
    1.引言第47-49页
    2.实验材料和方法第49-57页
        2.1 实验所用主要试剂和仪器第49-50页
            2.1.1 实验试剂第49-50页
            2.1.2 实验仪器第50页
        2.2 文蛤弧菌抗性差异群体的构建第50-51页
            2.2.1 抗性群体(09-R)和对照群体(09-C)的构建第50页
            2.2.2 抗性群组(11-R)和易感群组(11-S)的构建第50-51页
        2.3 基因组DNA的提取第51页
        2.4 候选免疫相关微卫星标记的开发第51-52页
        2.5 微卫星的扩增和分型第52-55页
        2.6 遗传多样性分析第55页
        2.7 微卫星与弧菌抗性性状的关联分析第55-56页
        2.8 弧菌抗性相关微卫星标记的验证第56页
        2.9 多维尺度分析(Multi-dimensional scaling,MDS)第56-57页
    3.实验结果第57-63页
        3.1 文蛤群体的遗传多样性第57页
        3.2 微卫星与弧菌抗性性状的关联分析第57-60页
        3.3 弧菌抗性相关微卫星标记的验证第60-62页
        3.4 多维尺度分析(MDS)第62-63页
        3.5 弧菌抗性相关微卫星标记的功能注释第63页
    4.讨论第63-65页
    小结第65-66页
第三章 文蛤弧菌抗性相关SNP标记的开发及鉴定第66-87页
    1.引言第66-67页
    2.实验材料和方法第67-71页
        2.1 实验所用主要试剂和仪器第67页
            2.1.1 实验试剂第67页
            2.1.2 实验仪器第67页
        2.2 文蛤弧菌抗性差异群体的构建第67页
        2.3 基因组DNA的提取第67页
        2.4 免疫相关SNP标记的初筛第67-69页
        2.5 SNP标记的分型第69-70页
        2.6 哈迪-温伯格平衡的检验第70页
        2.7 SNP与弧菌抗性性状的关联分析第70-71页
    3.实验结果第71-84页
        3.1 免疫相关SNP标记的开发第71-76页
        3.2 哈迪-温伯格平衡的检验第76-77页
        3.3 SNP与弧菌抗性性状的关联分析第77-80页
        3.4 连锁不平衡和单体型关联分析第80-82页
        3.5 弧菌抗性相关SNP标记的验证第82-83页
        3.6 弧菌抗性相关SNP标记的功能注释第83-84页
    4.讨论第84-86页
    小结第86-87页
第四章 文蛤免疫相关标记/基因的互作分析及其对弧菌抗性性状的影响第87-102页
    1.引言第87-88页
    2.实验材料和方法第88-89页
        2.1 实验所用主要试剂及仪器第88页
        2.2 候选免疫相关微卫星标记的交互作用分析第88页
        2.3 候选免疫相关SNP标记的交互作用分析第88-89页
        2.4 回归方程的建立第89页
    3.实验结果第89-100页
        3.1 候选免疫相关微卫星标记的交互作用分析第89-93页
            3.1.1 功能注释第89-90页
            3.1.2 MDR法分析微卫星标记间的交互作用第90-93页
            3.1.3 一般线性模型验证微卫星标记间的协同作用第93页
        3.2 候选免疫相关SNP标记的交互作用分析第93-97页
            3.2.1 功能注释第93-94页
            3.2.2 MDR法分析SNP标记间的交互作用第94-96页
            3.2.3 一般线性模型验证SNP标记间的协同作用第96-97页
        3.3 标记与弧菌抗性性状回归方程的建立第97-100页
    4.讨论第100-101页
    小结第101-102页
第五章 文蛤Hairy基因的克隆及其 3’-UTR中的两个SNP位点的功能分析第102-122页
    1.引言第102-104页
    2.实验材料和方法第104-111页
        2.1 实验所用主要试剂和仪器第104-105页
            2.1.1 实验试剂第104页
            2.1.2 实验仪器第104-105页
        2.2 文蛤材料和样品收集第105页
        2.3 DNA和RNA的提取,cDNA的合成第105-106页
            2.3.1 DNA和RNA的提取第105页
            2.3.2 cDNA的合成第105-106页
        2.4 cDNA全长的克隆第106-109页
            2.4.1 序列验证第106-108页
            2.4.2 5’-RACE和 3’-RACE第108-109页
        2.5 序列分析第109-110页
        2.6 组织及弧菌感染后MmeHairy的表达分析第110-111页
        2.7 SNP的分型和连锁不平衡分析第111页
        2.8 MmeHairy在不同基因型个体中的表达分析第111页
    3.结果第111-119页
        3.1 MmeHairy基因的序列分析第111-112页
        3.2 Mme Hairy的进化分析第112-113页
        3.3 MmeHairy的组织表达分析第113-114页
        3.4 MmeHairy在弧菌感染后不同时间点的表达分析第114-115页
        3.5 SNP标记的分型结果第115-117页
        3.6 不同基因型个体中MmeHairy的表达分析第117-119页
    4.讨论第119-121页
    小结第121-122页
第六章 文蛤分化抑制因子Id2的多态性及其与弧菌抗性性状的关联分析第122-140页
    1.引言第122-123页
    2.实验材料和方法第123-128页
        2.1 实验所用主要试剂和仪器第123-125页
            2.1.1 实验试剂第123-125页
            2.1.2 实验仪器第125页
        2.2 文蛤实验群体的构建第125页
            2.2.1 文蛤弧菌抗性差异群体 09-R和 09-C的构建第125页
            2.2.2 文蛤弧菌抗性差异群组 14-R和 14-S的构建第125页
        2.3 MmeId2基因序列的扩增第125-127页
        2.4 基因多态位点的筛选第127页
        2.5 弧菌感染后MmeId2的表达变化第127-128页
            2.5.1 荧光定量PCR检测mRNA表达变化第127页
            2.5.2 Western blot检测蛋白表达变化第127-128页
        2.6 抗性相关SNP标记的筛选第128页
    3.实验结果第128-137页
        3.1 MmeId2基因序列及其中的SNP位点信息第128-131页
        3.2 MmeId2在弧菌感染后不同时间点的表达分析第131-132页
        3.3 哈氏弧菌(V. harveyi)抗性相关SNP标记的筛选第132-134页
        3.4 副溶血弧菌(V. parahaemolyticus)抗性相关SNP标记的筛选第134-137页
    4.讨论第137-139页
    小结第139-140页
结论第140-141页
参考文献第141-162页
个人简历第162-163页
攻读学位期间发表的学术论文与研究成果第163页

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