| 摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第14-22页 |
| 1.1 出芽短梗霉介绍 | 第14页 |
| 1.2 普鲁兰糖概述 | 第14-15页 |
| 1.2.1 普鲁兰糖的基本结构 | 第14-15页 |
| 1.2.2 普鲁兰糖的性质 | 第15页 |
| 1.3 普鲁兰糖的生物合成途径 | 第15-16页 |
| 1.4 产普鲁兰糖条件优化 | 第16-17页 |
| 1.5 普鲁兰糖在医学上的应用 | 第17-19页 |
| 1.5.1 生物医学和制药工程 | 第17-18页 |
| 1.5.2 血浆扩张器 | 第18页 |
| 1.5.3 药物用途 | 第18-19页 |
| 1.6 分子水平上的研究 | 第19-20页 |
| 1.7 研究策略和内容 | 第20-22页 |
| 1.7.1 前期研究进展 | 第20页 |
| 1.7.2 本研究目的和内容 | 第20-22页 |
| 第二章 出芽短梗霉转录组学分析 | 第22-35页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 材料 | 第22-23页 |
| 2.2.1 菌株与试剂 | 第22页 |
| 2.2.2 仪器与设备 | 第22-23页 |
| 2.3 方法 | 第23-25页 |
| 2.3.1 样品制备 | 第23页 |
| 2.3.2 生物信息分析流程 | 第23页 |
| 2.3.3 序列拼接组装 | 第23页 |
| 2.3.4 基因功能注释 | 第23-24页 |
| 2.3.5 样本间基因表达水平相关性 | 第24页 |
| 2.3.6 差异表达基因功能注释 | 第24页 |
| 2.3.7 普鲁兰糖合成相关基因筛选 | 第24-25页 |
| 2.4 结果与分析 | 第25-34页 |
| 2.4.1 Unigenes文库的构建 | 第25页 |
| 2.4.2 测序数据质量评估 | 第25-27页 |
| 2.4.3 基因功能注释 | 第27-29页 |
| 2.4.4 样本间基因表达水平相关性分析 | 第29-30页 |
| 2.4.5 差异表达基因功能注释分析 | 第30-33页 |
| 2.4.6 普鲁兰糖合成相关基因筛选结果 | 第33-34页 |
| 2.5 结论与讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 普鲁兰糖合成相关基因在不同条件下的RT-qPCR结果分析 | 第35-48页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 材料 | 第35页 |
| 3.2.1 菌株与试剂 | 第35页 |
| 3.2.2 仪器与设备 | 第35页 |
| 3.3 方法 | 第35-39页 |
| 3.3.1 出芽短梗霉的培养与收集 | 第35-36页 |
| 3.3.2 多糖含量的测定 | 第36页 |
| 3.3.3 总RNA提取及cDNA第一条链合成 | 第36-38页 |
| 3.3.4 基因筛选及引物设计 | 第38页 |
| 3.3.5 普鲁兰糖合成相关基因的RT-qPCR验证 | 第38-39页 |
| 3.4 结果与分析 | 第39-47页 |
| 3.4.1 多糖产量分析 | 第39页 |
| 3.4.2 普鲁兰糖合成相关基因的RT-qPCR结果分析 | 第39-45页 |
| 3.4.3 普鲁兰糖合成相关基因的生物信息学分析 | 第45-47页 |
| 3.5 结论与讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 P1蛋白诱导纯化及P1基因敲除体系构建 | 第48-66页 |
| 4.1 引言 | 第48-49页 |
| 4.2 材料 | 第49-50页 |
| 4.2.1 菌株与试剂 | 第49-50页 |
| 4.2.2 仪器与设备 | 第50页 |
| 4.3 方法 | 第50-58页 |
| 4.3.1 菌株的培养与收集 | 第50页 |
| 4.3.2 总RNA提取及cDNA第一条链合成 | 第50页 |
| 4.3.3 P1基因RT-qPCR验证 | 第50页 |
| 4.3.4 P1基因的克隆及测序 | 第50-52页 |
| 4.3.5 P1表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 4.3.6 蛋白诱导及纯化 | 第54-55页 |
| 4.3.7 出芽短梗霉对潮霉素最低浓度抑制 | 第55-56页 |
| 4.3.8 P1基因敲除载体的构建 | 第56-57页 |
| 4.3.9 农杆菌侵染出芽短梗霉 | 第57-58页 |
| 4.4 结果与分析 | 第58-64页 |
| 4.4.1 P1基因的RT-qPCR验证 | 第58-59页 |
| 4.4.2 P1基因克隆结果 | 第59-61页 |
| 4.4.3 表达载体的构建 | 第61-62页 |
| 4.4.4 蛋白表达及纯化分析 | 第62-63页 |
| 4.4.5 出芽短梗霉对潮霉素最低浓度抑制 | 第63页 |
| 4.4.6 敲除载体的构建 | 第63-64页 |
| 4.4.7 农杆菌侵染出芽短梗霉 | 第64页 |
| 4.5 结论与讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 5.1 结论 | 第66-67页 |
| 5.1.1 出芽短梗霉普鲁兰糖合成相关基因的表达分析 | 第66页 |
| 5.1.2 P1蛋白诱导纯化及敲除体系构建 | 第66-67页 |
| 5.2 展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 附录 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第75页 |
