中文摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11-12页 |
1 前言 | 第13-24页 |
1.1 犬瘟热病毒的基本特征 | 第13-15页 |
1.1.1 犬瘟热病毒的宿主亲嗜性 | 第13-14页 |
1.1.2 犬瘟热病毒的培养特性 | 第14-15页 |
1.1.3 犬瘟热病毒的抵抗力 | 第15页 |
1.2 犬瘟热病毒基因组物质组成 | 第15-17页 |
1.2.1 核蛋白(nucleocapsid protein N) | 第15页 |
1.2.2 磷蛋白(phospho protein P) | 第15-16页 |
1.2.3 基质蛋白(matrix protein M) | 第16页 |
1.2.4 融合蛋白(fusion protein F) | 第16页 |
1.2.5 附着和血凝素蛋白(attachment protein or hemagglutinin protein H) | 第16-17页 |
1.2.6 大聚合酶蛋白(large polymerase protein L) | 第17页 |
1.3 犬瘟热病毒的复制及致病性 | 第17-18页 |
1.3.1 犬瘟热病毒的复制机理 | 第17页 |
1.3.2 犬瘟热病毒的致病机理 | 第17-18页 |
1.3.3 犬瘟热病毒的遗传变异 | 第18页 |
1.4 犬瘟热病毒的诊断技术 | 第18-23页 |
1.4.1 包涵体的检查 | 第18-19页 |
1.4.2 酶联免疫吸附试验 | 第19页 |
1.4.3 免疫胶体金技术 | 第19页 |
1.4.4 免疫荧光抗体方法 | 第19-20页 |
1.4.5 免疫组化技术 | 第20页 |
1.4.6 核酸杂交技术 | 第20-21页 |
1.4.7 逆转录聚合酶链式反应 | 第21页 |
1.4.8 多重聚合酶链式反应 | 第21页 |
1.4.9 巢式逆转录聚合酶链式反应 | 第21-22页 |
1.4.10 离子捕获电镜诊断 | 第22页 |
1.4.11 环介导等温扩增 | 第22-23页 |
1.4.12 实时荧光定量PCR | 第23页 |
1.5 犬瘟热病毒动物模型研究 | 第23-24页 |
1.6 本研究的目的与意义 | 第24页 |
2 材料与方法 | 第24-34页 |
2.1 材料 | 第24-27页 |
2.1.1 病料及病毒 | 第24页 |
2.1.2 主要仪器和试剂 | 第24-26页 |
2.1.2.1 仪器 | 第24-25页 |
2.1.2.2 试剂 | 第25页 |
2.1.2.3 试剂的配制 | 第25-26页 |
2.1.3 引物设计 | 第26-27页 |
2.1.3.1 检测引物设计 | 第26页 |
2.1.3.2 H、F与N基因扩增引物 | 第26-27页 |
2.1.4 参考毒株 | 第27页 |
2.2 试验方法 | 第27-34页 |
2.2.1 疑似病料检测及H、F、N全基因克隆测序 | 第27-34页 |
2.2.1.1 病料采集与处理 | 第27-28页 |
2.2.1.2 犬瘟热病毒RNA提取 | 第28页 |
2.2.1.3 反转录单链cDNA合成 | 第28-29页 |
2.2.1.4 病毒分离培养 | 第29-30页 |
2.2.1.5 病料检测及H、F与N全基因扩增 | 第30-31页 |
2.2.1.6 1%琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
2.2.1.7 目的片段的回收纯化 | 第31-32页 |
2.2.1.8 重组载体的构建 | 第32页 |
2.2.1.9 DH5α 感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
2.2.1.10 重组载体的转化 | 第33页 |
2.2.1.11 重组质粒的提取 | 第33页 |
2.2.1.12 重组质粒的酶切鉴定以及测序 | 第33-34页 |
2.2.2 分离毒株基因分析 | 第34页 |
3 结果 | 第34-44页 |
3.1 疑似病料检测 | 第34-35页 |
3.1.1 检测引物特异性试验结果 | 第34页 |
3.1.2 检测引物敏感性试验结果 | 第34页 |
3.1.3 检测引物重复性实验结果 | 第34-35页 |
3.1.4 病例样品检测结果 | 第35页 |
3.2 CDV分离结果 | 第35-36页 |
3.3 H、F与N全基因扩增结果 | 第36页 |
3.4 酶切鉴定结果 | 第36-37页 |
3.5 同源性分析与系统发育分析结果 | 第37-44页 |
3.5.1 N基因分析结果 | 第37-39页 |
3.5.2 H基因分析结果 | 第39-42页 |
3.5.3 F基因分析结果 | 第42-44页 |
4 讨论 | 第44-47页 |
5 结论 | 第47-48页 |
6 参考文献 | 第48-56页 |
7 致谢 | 第56页 |