| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 主要缩略词 | 第11-13页 |
| 1 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 RNA结合蛋白Fox1家族 | 第13-15页 |
| 1.2 组蛋白修饰与基因转录活性 | 第15-18页 |
| 1.3 PRC2催化H3K27me3抑制转录活性 | 第18-22页 |
| 1.4 PRC2招募过程 | 第22-25页 |
| 1.5 本研究目的、内容及创新性 | 第25-27页 |
| 1.5.1 主要研究目的 | 第25页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第25页 |
| 1.5.3 技术路线图 | 第25-26页 |
| 1.5.4 研究特色及创新性 | 第26-27页 |
| 2 RBFox2依赖于新生RNA结合于染色质基因转录起始位点区域 | 第27-47页 |
| 2.1 引言 | 第27-28页 |
| 2.2 主要材料与仪器 | 第28-31页 |
| 2.2.1 细胞培养相关试剂及小型仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.2 细胞、菌株及质粒 | 第29页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第29页 |
| 2.2.4 分子生物学及化学试剂 | 第29-31页 |
| 2.2.5 蛋白表达纯化及检测相关试剂 | 第31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-39页 |
| 2.3.1 MEF细胞培养 | 第31页 |
| 2.3.2 分离MEF细胞不同细胞组分 | 第31-32页 |
| 2.3.3 蛋白免疫印迹（Western blot） | 第32页 |
| 2.3.4 装pTRIPZ-HA-TDP43慢病毒 | 第32-33页 |
| 2.3.5 C2C12细胞培养及感染和稳定细胞株筛选 | 第33页 |
| 2.3.6 染色质免疫共沉淀 | 第33-34页 |
| 2.3.7 实时定量PCR反应 | 第34页 |
| 2.3.8 染色质免疫共沉淀及测序文库构建 | 第34-37页 |
| 2.3.9 RBFOX2 ChIP文库测序及后续数据处理分析 | 第37-39页 |
| 2.4 实验结果 | 第39-46页 |
| 2.4.1 RBFOX2细胞内定位 | 第39-40页 |
| 2.4.2 RBFOX2 ChIP-seq结果 | 第40-44页 |
| 2.4.3 RBFOX2通过新生RNA结合在基因转录起始位点 | 第44-46页 |
| 2.5 结果讨论 | 第46-47页 |
| 3 RBFOX2不依赖于RNA或DNA直接同PRC2相互作用 | 第47-67页 |
| 3.1 引言 | 第47-48页 |
| 3.2 实验设备、材料和试剂 | 第48-51页 |
| 3.2.1 细胞培养相关试剂及小型仪器 | 第48页 |
| 3.2.2 细胞、菌株及质粒 | 第48-49页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第49页 |
| 3.2.4 分子生物学主要试剂 | 第49-50页 |
| 3.2.5 白表达纯化及检测相关试剂 | 第50-51页 |
| 3.3 材料及方法 | 第51-57页 |
| 3.3.1 Sf9细胞培养 | 第51页 |
| 3.3.2 蛋白免疫共沉淀 | 第51页 |
| 3.3.3 构建PRC2亚基Bacmid质粒 | 第51-52页 |
| 3.3.4 包装及纯化PRC2亚基Baculovirus | 第52页 |
| 3.3.5 大规模表达及纯化PRC2 | 第52-53页 |
| 3.3.6 构建RBFOX2不同片段表达质粒 | 第53-55页 |
| 3.3.7 表达及纯化GST-RBFOX2不同片段蛋白 | 第55页 |
| 3.3.8 GST-RBFOX2 Pulldown实验 | 第55-57页 |
| 3.4 实验结果 | 第57-63页 |
| 3.4.1 Co-IP证明RBFOX2同PRC2相互作用 | 第57-59页 |
| 3.4.2 Sf9-baculovirus系统表达和纯化PRC2五个核心亚基 | 第59-60页 |
| 3.4.3 GST-Pulldown检测RBFOX2同PRC2相互作用 | 第60-61页 |
| 3.4.4 定位RBFOX2同PRC2相互作用的结构域 | 第61-63页 |
| 3.5 结果讨论 | 第63-67页 |
| 4 Rbfox2沉默引起基因组水平启动子区域H3K27me3修饰改变 | 第67-85页 |
| 4.1 引言 | 第67-68页 |
| 4.2 主要材料与仪器 | 第68-71页 |
| 4.2.1 细胞培养相关试剂及小型仪器 | 第68-69页 |
| 4.2.2 细胞、菌株及质粒 | 第69页 |
| 4.2.3 干细胞培养及分化特殊试剂 | 第69页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第69页 |
| 4.2.5 分子生物学及化学试剂 | 第69-71页 |
| 4.2.6 蛋白表达纯化及检测相关试剂 | 第71页 |
| 4.3 实验方法 | 第71-77页 |
| 4.3.1 STO饲养层细胞培养及生长抑制处理 | 第71页 |
| 4.3.2 胚胎干细胞（ESCs）复苏、培养 | 第71-72页 |
| 4.3.3 包装RBFOX2 shRNA慢病毒 | 第72-73页 |
| 4.3.4 RNA提取及反转录 | 第73页 |
| 4.3.5 实时定量PCR反应检测基因表达 | 第73-74页 |
| 4.3.6 ESCs中H3K27me3 ChIP | 第74-75页 |
| 4.3.7 染色质免疫共沉淀测序文库构建 | 第75-77页 |
| 4.3.8 H3K27me3 ChIP文库测序及后续数据处理分析 | 第77页 |
| 4.4 实验结果 | 第77-81页 |
| 4.4.1 RBFox2沉默对胚胎干细胞（ESCs）多能性的影响 | 第77-78页 |
| 4.4.2 不同培养状态下沉默RBFox2对H3K27me3修饰的影响 | 第78-81页 |
| 4.5 结果讨论 | 第81-85页 |
| 5 ERK1/2 信号通路调节RBFOX2磷酸化修饰 | 第85-101页 |
| 5.1 引言 | 第85页 |
| 5.2 主要材料与仪器 | 第85-89页 |
| 5.2.1 细胞培养相关试剂及小型仪器 | 第85-86页 |
| 5.2.2 细胞、菌株及质粒 | 第86-87页 |
| 5.2.3 干细胞培养及分化特殊试剂 | 第87页 |
| 5.2.4 主要仪器 | 第87页 |
| 5.2.5 分子生物学及化学试剂 | 第87-88页 |
| 5.2.6 蛋白表达纯化及检测相关试剂 | 第88-89页 |
| 5.3 实验方法 | 第89-94页 |
| 5.3.1 使用Gateway系统构建RBFOX2可诱导表达质粒 | 第89-90页 |
| 5.3.2 使用Flp-in系统构建稳定 293 shFox2-Fox2a和 293 shFox2-Fox2f细胞系 | 第90-91页 |
| 5.3.3 ESCs分化为心肌细胞 | 第91页 |
| 5.3.4 神经干细胞培养及分化为神经元细胞 | 第91-92页 |
| 5.3.5 免疫荧光染色 | 第92页 |
| 5.3.6 WB方法磷酸化蛋白迁移速率检测 | 第92-93页 |
| 5.3.7 体外ERK2激酶磷酸化RBFOX2 | 第93-94页 |
| 5.4 实验结果 | 第94-98页 |
| 5.4.1 两种RBFOX2剪切变异体转变 | 第94-95页 |
| 5.4.2 ERK1/2 信号通路激活导致RBFOX2蛋白迁移速率减低 | 第95-97页 |
| 5.4.3 体外ERK2激酶磷酸化RBFOX2蛋白 | 第97-98页 |
| 5.5 结果讨论 | 第98-101页 |
| 6 ERK1/2 信号通路通过磷酸化RBFOX2改变其RNA结合能力 | 第101-113页 |
| 6.1 引言 | 第101页 |
| 6.2 主要材料与仪器 | 第101-104页 |
| 6.2.1 细胞培养相关试剂及小型仪器 | 第101-102页 |
| 6.2.2 细胞、菌株及质粒 | 第102页 |
| 6.2.3 主要仪器 | 第102-103页 |
| 6.2.4 分子生物学及化学试剂 | 第103页 |
| 6.2.5 蛋白表达纯化及检测相关试剂 | 第103-104页 |
| 6.3 实验方法 | 第104-106页 |
| 6.3.1 免疫荧光染色 | 第104页 |
| 6.3.2 蛋白免疫共沉淀 | 第104页 |
| 6.3.3 GST-Pulldown | 第104-105页 |
| 6.3.4 RBFOX2 RNA IP-qPCR | 第105页 |
| 6.3.5 RBFOX2 ChIP-qPCR | 第105-106页 |
| 6.3.6 报告基因检测RBFOX2剪切能力 | 第106页 |
| 6.4 实验结果 | 第106-110页 |
| 6.4.1 RBFOX2磷酸化不会改变其细胞内定位 | 第106-107页 |
| 6.4.2 RBFOX2磷酸化不能改变其同PRC2蛋白蛋白相互作用 | 第107-108页 |
| 6.4.3 RBFOX2磷酸化会改变其核酸结合能力 | 第108-109页 |
| 6.4.4 RBFOX2磷酸化会改变其可变剪切调节能力 | 第109-110页 |
| 6.5 结果讨论 | 第110-113页 |
| 7 结论和展望 | 第113-117页 |
| 7.1 主要结果和结论 | 第113-116页 |
| 7.2 未来工作展望 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-137页 |
| 附录 作者在攻读博士学位期间发表论文及专利情况 | 第137页 |
