| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 家蚕二分浓核病毒研究概况 | 第13页 |
| 1.2 家蚕二分浓核病毒与细小病毒结构相似与不同 | 第13-14页 |
| 1.3 家蚕二分浓核病毒复制机制与腺病毒相似与不同 | 第14-16页 |
| 1.4 家蚕二分浓核病毒有作为载体的潜能 | 第16-17页 |
| 1.5 昆虫病毒载体在生物防治中的研究现状和发展趋势 | 第17页 |
| 1.6 家蚕二分浓核病毒研究现状 | 第17-19页 |
| 1.7 立题依据和意义 | 第19-20页 |
| 1.8 主要研究内容和技术路线 | 第20-23页 |
| 1.8.1 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.8.2 技术路线 | 第21-23页 |
| 第二章 可恢复线性末端结构全基因组克隆质粒构建 | 第23-42页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株以及质粒 | 第24页 |
| 2.1.2.主要试剂及溶液的配制 | 第24-26页 |
| 2.1.3 实验中所用仪器与设备 | 第26页 |
| 2.2 实验设计和序列分析 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-36页 |
| 2.3.1 构建可恢复线性末端结构全基因组克隆质粒以及鉴定 | 第27-32页 |
| 2.3.2 病毒重复末端突变序列对P5启动子活性的影响 | 第32-34页 |
| 2.3.3 感受态细胞的转化 | 第34-35页 |
| 2.3.4 BmN细胞的培养 | 第35-36页 |
| 2.4 结果与分析 | 第36-40页 |
| 2.4.1 病毒可恢复线性末端结构的全基因组克隆 | 第36-38页 |
| 2.4.2 病毒重复末端突变序列对P5启动子活性的影响 | 第38-40页 |
| 2.5 讨论与小结 | 第40-42页 |
| 第三章 重组病毒质粒的构建 | 第42-49页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第42页 |
| 3.1.1 菌株以及质粒 | 第42页 |
| 3.1.2 主要试剂及溶液配制 | 第42页 |
| 3.1.3 实验中所用仪器设备 | 第42页 |
| 3.2 重组质粒构建策略 | 第42-43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-44页 |
| 3.3.1 gfp基因表达盒克隆质粒的构建 | 第43页 |
| 3.3.2 BmN细胞的转染 | 第43-44页 |
| 3.3.3 重组病毒克隆质粒的构建 | 第44页 |
| 3.4 结果与分析 | 第44-47页 |
| 3.4.1 构建gfp基因表达盒克隆质粒 | 第44-46页 |
| 3.4.2 gfp基因表达盒质粒转染BmN细胞 | 第46页 |
| 3.4.3 重组病毒pVD2-mcp/gfp质粒的构建 | 第46-47页 |
| 3.5 讨论与小结 | 第47-49页 |
| 第四章 线性化病毒基因组的拯救 | 第49-65页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第49-50页 |
| 4.1.1 菌株以及质粒 | 第49页 |
| 4.1.2 主要试剂及溶液配制 | 第49-50页 |
| 4.1.3 实验中所用仪器设备 | 第50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-57页 |
| 4.2.1.转染实验质粒的准备 | 第50-51页 |
| 4.2.2 BmN细胞的共转染 | 第51-52页 |
| 4.2.3 BmN细胞的培养与观察 | 第52页 |
| 4.2.4 共转染的BmN细胞Western blot检测 | 第52-55页 |
| 4.2.5 共转染BmN细胞的RT-PCR检测 | 第55-56页 |
| 4.2.6 共转染BmN细胞的PCR检测 | 第56-57页 |
| 4.3 结果与分析 | 第57-64页 |
| 4.3.1 全基因组共转染对BmN细胞的感染性 | 第57-58页 |
| 4.3.2 重组病毒基因组共转染对BmN细胞的感染性 | 第58-59页 |
| 4.3.3 BmN细胞中重构病毒样粒子非结构蛋白基因的转录 | 第59-60页 |
| 4.3.4 BmN细胞中重构病毒样粒子结构蛋白和外源基因的表达 | 第60-62页 |
| 4.3.5 BmN细胞中重构病毒样粒子子代DNA的复制 | 第62-64页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第64-65页 |
| 第五章 BmN细胞中重构病毒样粒子感染性检测 | 第65-69页 |
| 5.1 材料和试剂 | 第65页 |
| 5.1.1 主要试剂及溶液配制 | 第65页 |
| 5.1.2 实验中所用仪器设备 | 第65页 |
| 5.2 实验方法 | 第65-66页 |
| 5.2.1 感染性实验病变BmN细胞的收集与处理 | 第65-66页 |
| 5.2.2 病变BmN细胞沉淀悬浮液添食家蚕幼虫 | 第66页 |
| 5.2.3 感染性实验中感病家蚕幼虫的解剖 | 第66页 |
| 5.3 结果与分析 | 第66-68页 |
| 5.3.1 全基因组共转染BmN细胞后回感家蚕幼虫 | 第66-67页 |
| 5.3.2 重组病毒基因组共转染BmN细胞后回感的家蚕幼虫 | 第67-68页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第68-69页 |
| 第六章 总结与展望 | 第69-71页 |
| 6.1 主要工作总结 | 第69-70页 |
| 6.2 工作展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
| 硕士在读期间发表的文章 | 第78页 |
| 参与研究项目 | 第78页 |
