| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 1 综述 | 第8-14页 |
| ·H5N1病毒的病原学 | 第8页 |
| ·高致病性禽流感疫苗的概况 | 第8-11页 |
| ·传统疫苗 | 第9页 |
| ·新型疫苗 | 第9-11页 |
| ·佐剂应用于流感疫苗的概况 | 第11-14页 |
| ·常用佐剂 | 第11-12页 |
| ·新型佐剂 | 第12-14页 |
| 2 佐剂蛋白ASP-1的设计与制备 | 第14-24页 |
| ·材料 | 第14-15页 |
| ·质粒和菌株 | 第14页 |
| ·引物 | 第14页 |
| ·试剂 | 第14页 |
| ·其它配制的液体 | 第14-15页 |
| ·方法 | 第15-18页 |
| ·截短片断ASP-1的设计 | 第15页 |
| ·表达质粒pQE30-ASP-1的构建 | 第15页 |
| ·重组蛋白ASP-1的诱导表达 | 第15-18页 |
| ·实验结果 | 第18-23页 |
| ·ASP-1蛋白抗原表位预测 | 第18页 |
| ·ASP-1全长蛋白和ASP-1截短片段二级结构分析 | 第18-19页 |
| ·表达质粒pQE30-ASP-1的构建及鉴定 | 第19-20页 |
| ·重组蛋白ASP-1的表达及表达形式的SDS-PAGE鉴定 | 第20-21页 |
| ·重组蛋白ASP-1的纯化SDS-PAGE鉴定 | 第21-22页 |
| ·重组蛋白ASP-1的Western Blot鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组蛋白ASP-1纯度、浓度及内毒素分析 | 第23页 |
| ·讨论 | 第23-24页 |
| 3 以ASP-1为佐剂研制H5N1病毒HA重组疫苗的试验研究 | 第24-37页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·质粒、细菌、细胞 | 第24页 |
| ·病毒cDNA和引物 | 第24-25页 |
| ·实验动物 | 第25页 |
| ·病毒 | 第25页 |
| ·生物安全条件 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·其它配制的液体 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-29页 |
| ·利用Bac toBac杆状病毒表达系统表达HA重组蛋白 | 第25-27页 |
| ·动物免疫与攻毒 | 第27-28页 |
| ·ELISA检测 | 第28页 |
| ·中和试验 | 第28页 |
| ·肺组织病毒滴度检测 | 第28-29页 |
| ·统计学分析 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-35页 |
| ·含有HA基因的重组供体质粒pFastBac-HA的构建 | 第29-30页 |
| ·HA重组蛋白的SDS-PAGE及Western Blot检测 | 第30-31页 |
| ·HA重组蛋白的纯度和浓度分析 | 第31-32页 |
| ·免疫小鼠血清HA特异性抗体滴度 | 第32页 |
| ·抗原特异性细胞免疫应答情况 | 第32-33页 |
| ·免疫小鼠攻毒后免疫保护效果 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 4 以ASP-1为佐剂研制H5N1病毒交叉保护性疫苗的试验研究 | 第37-53页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·质粒和菌株 | 第37页 |
| ·合成肽 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·实验动物 | 第37-38页 |
| ·病毒和细胞 | 第38页 |
| ·生物安全条件 | 第38页 |
| ·其它配制的液体 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-42页 |
| ·H5N1病毒M2e多序列比对与保守性分析 | 第38页 |
| ·高致病性禽流感H5N1疫苗设计 | 第38-39页 |
| ·柔性分析 | 第39页 |
| ·表达质粒pET32a-M2e3的构建 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白TrxA-M2e3的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·动物免疫与攻毒 | 第41页 |
| ·ELISA检测 | 第41页 |
| ·流式细胞术检测 | 第41-42页 |
| ·肺组织病毒滴度检测 | 第42页 |
| ·统计学分析 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-51页 |
| ·H5N1病毒M2e多序列的比对与保守性分析结果 | 第42-43页 |
| ·柔性分析结果 | 第43-44页 |
| ·表达质粒pET32a-M2e3的构建 | 第44-45页 |
| ·重组表达蛋白TrxA-M2e3的SDS-PAGE鉴定和Western Blot检测 | 第45-47页 |
| ·重组蛋白TrxA-M2e3纯度、浓度及内毒素分析 | 第47页 |
| ·免疫小鼠血清M2e特异性抗体滴度 | 第47-48页 |
| ·抗原特异性细胞免疫应答结果 | 第48-50页 |
| ·免疫小鼠攻毒后肺组织病毒滴度 | 第50页 |
| ·免疫小鼠攻毒后存活情况 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 5 全文总结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 缩略词表 | 第62-64页 |
| 附录 主要溶液的配制 | 第64-69页 |
| 个人简介 | 第69页 |
