| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述及选题指导思想 | 第12-47页 |
| 1.1 肿瘤的产生及治疗现状 | 第12-13页 |
| 1.2 纳米颗粒用作基因输送载体 | 第13-16页 |
| 1.3 基因输送过程中遇到的障碍 | 第16-20页 |
| 1.3.1 细胞外障碍 | 第16-18页 |
| 1.3.2 细胞内障碍 | 第18-20页 |
| 1.4 合理设计基因载体 | 第20-29页 |
| 1.4.1 聚合物基因载体 | 第20-24页 |
| 1.4.2 制备基因输送体系的主要方法 | 第24页 |
| 1.4.3 设计靶向性的基因治疗运载系统 | 第24-29页 |
| 1.5 实验中涉及到的重要生物学概念 | 第29-35页 |
| 1.5.1 shRNA | 第29-30页 |
| 1.5.2 肿瘤干细胞和Bmi-1 | 第30-33页 |
| 1.5.3 ABCG2与耐药 | 第33-34页 |
| 1.5.4 TRAIL和细胞凋亡 | 第34-35页 |
| 1.6 选题意义及指导思想 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-47页 |
| 第二章 含有细胞膜靶向的层状纳米颗粒在体内和体外的转染研究 | 第47-69页 |
| 2.1 引言 | 第47-48页 |
| 2.2 实验部分 | 第48-52页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第48页 |
| 2.2.2 肝素-透明质酸(HA-HP)的制备 | 第48-49页 |
| 2.2.3 三元复合物的组装和表征 | 第49页 |
| 2.2.4 复合物稳定性的测试 | 第49-50页 |
| 2.2.5 复合物在还原性条件下的稳定性测试 | 第50页 |
| 2.2.6 体外转染实验 | 第50-51页 |
| 2.2.7 用酶联免疫吸附实验验证复合物对小鼠的毒性 | 第51-52页 |
| 2.2.8 肿瘤起始实验验证复合物递送质粒的效率 | 第52页 |
| 2.2.9 测定复合物对肿瘤干细胞形成的影响 | 第52页 |
| 2.2.10 用免疫组织化学方法检测蛋白的表达 | 第52页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第52-65页 |
| 2.3.1 HA-HP的制备与表征 | 第52-54页 |
| 2.3.2 复合物的形态和表征 | 第54-55页 |
| 2.3.3 透明质酸酶和氧化还原环境对复合物物理化学特性的影响 | 第55-57页 |
| 2.3.4 HP的竞争作用对DNA释放的促进作用 | 第57-58页 |
| 2.3.5 复合物对细胞的毒性实验 | 第58-59页 |
| 2.3.6 复合物体外转染实验 | 第59-61页 |
| 2.3.7 复合物的细胞摄取实验 | 第61-62页 |
| 2.3.8 小球形成实验 | 第62-64页 |
| 2.3.9 小鼠移植模型 | 第64-65页 |
| 2.4 小结 | 第65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 第三章 具有增强溶酶体逃逸的纳米载体输送shRNA及其用于肿瘤治疗的研究 | 第69-90页 |
| 3.1 引言 | 第69-71页 |
| 3.2 实验部分 | 第71-76页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第71页 |
| 3.2.2 Au-PEI的合成 | 第71-72页 |
| 3.2.3 CS-Aco和CS-Car的合成 | 第72页 |
| 3.2.4 复合物的层层自组装 | 第72页 |
| 3.2.5 凝胶电泳实验 | 第72页 |
| 3.2.6 shRNA的释放实验 | 第72页 |
| 3.2.7 细胞摄入实验 | 第72-73页 |
| 3.2.8 验证阿霉素对细胞的毒性 | 第73页 |
| 3.2.9 shABCG2的克隆 | 第73页 |
| 3.2.10 HepG2细胞RNA的抽提 | 第73-74页 |
| 3.2.11 实时定量PCR(Realtime PCR) | 第74页 |
| 3.2.12 免疫印迹试验(Western Blot) | 第74页 |
| 3.2.13 流式细胞术(FACS) | 第74-75页 |
| 3.2.14 免疫组化(IHC) | 第75页 |
| 3.2.15 免疫荧光(IF) | 第75页 |
| 3.2.16 体内移植瘤实验 | 第75-76页 |
| 3.2.17 统计分析 | 第76页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第76-87页 |
| 3.3.1 Au-PEI/CS-Aco/PEI/shRNA的负载实验及检测 | 第76-77页 |
| 3.3.2 shRNA与Au-PEI/CS-Aco/PEI的复合能力 | 第77页 |
| 3.3.3 pH对shRNA释放的影响 | 第77-78页 |
| 3.3.4 细胞对Au-PEI/CS-Aco/PEI/shRNA的摄取效率 | 第78-80页 |
| 3.3.5 shRNA内涵体逃逸效果 | 第80-81页 |
| 3.3.6 细胞毒性实验 | 第81-82页 |
| 3.3.7 细胞内ABCG2的表达量 | 第82-83页 |
| 3.3.8 Au-PEI/CS-Aco/PEI/shABCG2增强细胞对药物的敏感性 | 第83-85页 |
| 3.3.9 药物在肿瘤细胞的富集 | 第85页 |
| 3.3.10 肿瘤的治疗效果 | 第85-87页 |
| 3.4 小结 | 第87页 |
| 参考文献 | 第87-90页 |
| 第四章 具有核靶向功能的纳米颗粒在体内和体外的转染研究 | 第90-110页 |
| 4.1 引言 | 第90-92页 |
| 4.2 实验部分 | 第92-96页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第92页 |
| 4.2.2 Au-PEI纳米颗粒的合成 | 第92页 |
| 4.2.3 PEI-Dexa的合成 | 第92页 |
| 4.2.4 Au-PEI/DNA/PEI-Dexa三元复合物的制备 | 第92页 |
| 4.2.5 Au-PEI/DNA/PEI-Dexa的表征 | 第92-93页 |
| 4.2.6 复合物对细胞的毒性实验 | 第93页 |
| 4.2.7 体外转染实验 | 第93页 |
| 4.2.8 Cy5标记DNA的实验过程 | 第93页 |
| 4.2.9 细胞内吞实验 | 第93-94页 |
| 4.2.10 复合物在细胞内的共定位实验 | 第94页 |
| 4.2.11 核质分离实验 | 第94页 |
| 4.2.12 TRAIL克隆 | 第94-95页 |
| 4.2.13 体内转染实验 | 第95页 |
| 4.2.14 免疫组化 | 第95页 |
| 4.2.15 免疫印迹 | 第95页 |
| 4.2.16 检测TRAIL的表达量实验 | 第95-96页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第96-107页 |
| 4.3.1 Au-PEI/DNA/PEI-Dexa的合成 | 第96-97页 |
| 4.3.2 Au-PEI/DNA/PEI-Dexa纳米复合物的表征 | 第97-100页 |
| 4.3.3 细胞毒性 | 第100-101页 |
| 4.3.4 体外转染 | 第101-102页 |
| 4.3.5 细胞摄入实验 | 第102页 |
| 4.3.6 纳米复合物在细胞内的分布 | 第102-104页 |
| 4.3.7 核质分布 | 第104-105页 |
| 4.3.8 体内基因输送能力 | 第105-107页 |
| 4.4 小结 | 第107页 |
| 参考文献 | 第107-110页 |
| 第五章 双响应纳米载体的合成及基因递送的研究 | 第110-128页 |
| 5.1 引言 | 第110-111页 |
| 5.2 实验部分 | 第111-114页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第111-112页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第112-113页 |
| 5.2.3 细胞培养 | 第113页 |
| 5.2.4 细胞毒性 | 第113-114页 |
| 5.2.5 体外转染实验 | 第114页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第114-124页 |
| 5.3.1 PA-PEI-SS的合成和表征 | 第114-116页 |
| 5.3.2 复合物的特征 | 第116-120页 |
| 5.3.3 聚合物的双重降解特性 | 第120-121页 |
| 5.3.4 细胞毒性实验 | 第121-122页 |
| 5.3.5 体外转染 | 第122-124页 |
| 5.4 小结 | 第124页 |
| 参考文献 | 第124-128页 |
| 主要结论 | 第128-130页 |
| 博士研究生阶段主要研究成果 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
