| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 铜对鱼类的毒理效应 | 第10页 |
| 1.1 铜污染的来源与危害 | 第10页 |
| 1.2 铜的毒理学机理 | 第10页 |
| 2 金属硫蛋白的研究进展 | 第10-15页 |
| 2.1 金属硫蛋白定义 | 第10-11页 |
| 2.2 金属硫蛋白的理化性质 | 第11页 |
| 2.3 金属硫蛋白分类 | 第11-12页 |
| 2.4 金属硫蛋白的结构 | 第12-13页 |
| 2.4.1 MT的一级结构 | 第12页 |
| 2.4.2 MT的空间结构 | 第12-13页 |
| 2.5 金属硫蛋白的功能 | 第13-14页 |
| 2.5.1 拮抗金属解毒 | 第13页 |
| 2.5.2 调节微量元素的储存、运输和代谢 | 第13-14页 |
| 2.5.3 清除羟自由基，拮抗电离辐射 | 第14页 |
| 2.5.4 参与激素和发育调节，增强机体应激反应 | 第14页 |
| 2.5.5 免疫调节作用 | 第14页 |
| 2.6 金属硫蛋白的现实应用 | 第14-15页 |
| 2.6.1 环境监测 | 第14-15页 |
| 2.6.2 生物工程 | 第15页 |
| 2.6.3 医疗保健 | 第15页 |
| 3 重金属对水生动物MT表达影响的研究 | 第15-18页 |
| 3.1 水生动物MT分子生物学研究进展 | 第15-16页 |
| 3.2 水生动物MT分子毒理学 | 第16-17页 |
| 3.3 重金属对水生动物MT的诱导机理 | 第17-18页 |
| 4 研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 试验一 黄河鲤金属硫蛋白基因的克隆及序列分析 | 第19-26页 |
| 1 材料与方法 | 第19-21页 |
| 1.1 试验材料 | 第19-20页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第19页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第19页 |
| 1.1.3 试验仪器 | 第19-20页 |
| 1.2 试验方法 | 第20-21页 |
| 1.2.1 总RNA的提取 | 第20页 |
| 1.2.2 反转录 | 第20页 |
| 1.2.3 引物设计及PCR扩增 | 第20页 |
| 1.2.4 PCR产物纯化 | 第20页 |
| 1.2.5 目的基因片段的连接与转化 | 第20页 |
| 1.2.6 MT基因序列分析 | 第20-21页 |
| 2 结果与分析 | 第21-24页 |
| 2.1 总RNA的提取 | 第21页 |
| 2.2 MT基因片段的PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.3 MT基因的生物信息学分析 | 第22-24页 |
| 2.3.1 黄河鲤MT基因及氨基酸序列分析 | 第22-23页 |
| 2.3.2 同源性及分子进化分析 | 第23-24页 |
| 3 讨论 | 第24-26页 |
| 试验二 黄河鲤金属硫蛋白基因的组织表达 | 第26-33页 |
| 1 材料与方法 | 第26-28页 |
| 1.1 试验材料 | 第26-27页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第26页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第26页 |
| 1.1.3 试验仪器 | 第26页 |
| 1.1.4 试验所用溶液的配制方法 | 第26-27页 |
| 1.2 试验方法 | 第27-28页 |
| 1.2.1 总RNA的提取 | 第27页 |
| 1.2.2 总RNA浓度、纯度和完整性分析 | 第27页 |
| 1.2.3 反转录 | 第27页 |
| 1.2.4 实时荧光定量PCR的引物设计 | 第27页 |
| 1.2.5 黄河鲤MT基因的RT-qPCR检测方法的建立 | 第27-28页 |
| 1.2.5.1 两种引物最佳退火温度的摸索 | 第27页 |
| 1.2.5.2 两种引物RT-qPCR标准曲线的建立 | 第27-28页 |
| 1.2.6 黄河鲤MT基因组织表达分析 | 第28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-32页 |
| 2.1 总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.2 两种引物RT-qPCR标准曲线的建立 | 第28-31页 |
| 2.2.1 两种引物最佳退火温度的摸索 | 第28-29页 |
| 2.2.2 两种引物RT-qPCR标准曲线的建立 | 第29-31页 |
| 2.3 黄河鲤MT基因组织表达分析 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-33页 |
| 试验三 水体铜暴露对黄河鲤金属硫蛋白基因表达的影响 | 第33-43页 |
| 1 材料与方法 | 第33-34页 |
| 1.1 试验材料 | 第33页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第33页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第33页 |
| 1.1.3 试验仪器 | 第33页 |
| 1.2 试验方法 | 第33-34页 |
| 1.2.1 攻毒浓度 | 第33-34页 |
| 1.2.2 样品采集 | 第34页 |
| 1.2.3 总RNA的提取和检测 | 第34页 |
| 1.2.4 反转录 | 第34页 |
| 1.2.5 荧光定量PCR对黄河鲤MT基因的检测分析 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-41页 |
| 2.1 总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2 荧光定量PCR的特异性扩增 | 第35页 |
| 2.3 水体铜对黄河鲤MT基因的诱导表达 | 第35-41页 |
| 2.3.1 不同浓度Cu~(2+)对黄河鲤肝胰脏MT基因表达的影响 | 第35-37页 |
| 2.3.2 不同浓度Cu~(2+)对黄河鲤肾脏MT基因表达的影响 | 第37-38页 |
| 2.3.3 不同浓度Cu~(2+)对黄河鲤鳃组织MT基因表达的影响 | 第38-39页 |
| 2.3.4 不同浓度Cu~(2+)对黄河鲤脑组织MT基因表达的影响 | 第39-40页 |
| 2.3.5 不同浓度Cu~(2+)对黄河鲤肌肉MT基因表达的影响 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 全文结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| ABSTRACT | 第50-51页 |
