| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 磷脂和磷脂酶 | 第8-9页 |
| 1.1.1 磷脂 | 第8页 |
| 1.1.2 磷脂酶 | 第8-9页 |
| 1.2 磷脂酶C的应用 | 第9页 |
| 1.3 磷脂酶C的检测方法 | 第9-10页 |
| 1.3.1 卵黄平板法 | 第10页 |
| 1.3.2 p-NPPC法 | 第10页 |
| 1.4 微生物磷脂酶C的研究现状 | 第10-11页 |
| 1.5 微生物表达系统的研究 | 第11-13页 |
| 1.5.1 大肠杆菌表达系统 | 第11-12页 |
| 1.5.2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第12页 |
| 1.5.3 乳酸克鲁维酵母表达系统 | 第12页 |
| 1.5.4 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第12-13页 |
| 1.6 本课题立体意义及研究内容 | 第13-14页 |
| 1.6.1 立题意义 | 第13页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第14-23页 |
| 2.1 材料 | 第14-16页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第14页 |
| 2.1.2 引物 | 第14页 |
| 2.1.3 主要试剂和工具酶 | 第14-15页 |
| 2.1.4 培养基和试剂 | 第15页 |
| 2.1.5 仪器和设备 | 第15-16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-23页 |
| 2.2.1 出发菌株的确定 | 第16页 |
| 2.2.2 蜡样芽胞杆菌DNA基因组的提取 | 第16-17页 |
| 2.2.3 酵母染色体基因组的提取(玻璃珠法) | 第17页 |
| 2.2.4 目的基因的PCR扩增 | 第17-18页 |
| 2.2.5 基因片段与载体的连接 | 第18页 |
| 2.2.6 感受态细胞的制备及转化 | 第18-19页 |
| 2.2.7 重组大肠杆菌的诱导表达 | 第19-20页 |
| 2.2.8 重组枯草芽胞杆菌的诱导表达 | 第20页 |
| 2.2.9 重组乳酸克鲁维酵母的分泌表达 | 第20页 |
| 2.2.10 PLC酶活力的测定 | 第20-21页 |
| 2.2.11 蛋白含量的测定 | 第21页 |
| 2.2.12 重组大肠杆菌磷脂酶C的纯化 | 第21页 |
| 2.2.13 重组枯草芽孢杆菌磷脂酶C的纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.14 重组乳酸克鲁维酵母磷脂酶C的纯化 | 第22页 |
| 2.2.15 糖基化的鉴定方法 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-40页 |
| 3.1 B.cereus磷脂酶C基因在大肠杆菌中的表达 | 第23-26页 |
| 3.1.1 B.cereus磷脂酶C基因的克隆 | 第23页 |
| 3.1.2 大肠杆菌BL21(DE3)重组表达载体的构建 | 第23-24页 |
| 3.1.3 B.cereus磷脂酶C基因在E.coli中的验证表达及纯化 | 第24-26页 |
| 3.2 B.cereus磷脂酶C基因在K.lactis中的表达 | 第26-30页 |
| 3.2.1 B.cereus磷脂酶C基因的克隆 | 第26-27页 |
| 3.2.2 K.lactic表达载体pKLAC1bcplc2的构建 | 第27页 |
| 3.2.3 K.lactics GG799/pKLAC1bcplc2的筛选与验证 | 第27-28页 |
| 3.2.4 B.cereus磷脂酶C基因在K.Lactics GG799中的验证表达和纯化 | 第28-30页 |
| 3.2.5 酶法鉴定GG799/PLC糖基化 | 第30页 |
| 3.3 B.cereus磷脂酶C基因在B.subtilis WB600中的表达 | 第30-33页 |
| 3.3.1 B.cereus磷脂酶C基因的克隆 | 第30-31页 |
| 3.3.2 B.subtilis WB600表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.3.3 B.cereus磷脂酶C基因在B.subtilis WB600中的验证表达和纯化 | 第32-33页 |
| 3.4 重组磷脂酶C的酶学性质分析 | 第33-38页 |
| 3.4.1 最适反应温度的测定 | 第33-34页 |
| 3.4.2 最适pH的分析 | 第34-35页 |
| 3.4.3 热稳定性分析 | 第35-36页 |
| 3.4.4 pH耐受性分析 | 第36页 |
| 3.4.5 金属离子对酶活的影响 | 第36-38页 |
| 3.5 重组磷脂酶C的DSC测定 | 第38页 |
| 3.6 重组磷脂酶C二级结构的比较 | 第38-40页 |
| 主要结论与展望 | 第40-42页 |
| 主要结论 | 第40页 |
| 展望 | 第40-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第47页 |
