| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 乙醇脱氢酶 | 第7-10页 |
| 1.1.1 乙醇脱氢酶的来源及分类 | 第7-8页 |
| 1.1.2 乙醇脱氢酶的结构及功能 | 第8-9页 |
| 1.1.3 乙醇脱氢酶与乙醇代谢 | 第9-10页 |
| 1.1.4 乙醇脱氢酶的应用 | 第10页 |
| 1.2 乙醇脱氢酶研究进展 | 第10-11页 |
| 1.3 酶的改性 | 第11-14页 |
| 1.3.1 酶的改性方法简介 | 第12页 |
| 1.3.2 酶的固定化 | 第12-14页 |
| 1.4 课题研究目的与意义 | 第14页 |
| 1.5 课题主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-22页 |
| 2.1 实验菌株与载体 | 第15页 |
| 2.2 主要试剂及溶液配制 | 第15-16页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第15页 |
| 2.2.2 实验溶液配制 | 第15-16页 |
| 2.3 实验仪器 | 第16页 |
| 2.4 实验方法 | 第16-22页 |
| 2.4.1 大肠杆菌adh7基因合成和引物设计 | 第16页 |
| 2.4.2 PCR扩增 | 第16-17页 |
| 2.4.3 表达载体的构建 | 第17页 |
| 2.4.4 目的蛋白诱导表达条件的优化 | 第17页 |
| 2.4.5 包涵体溶解条件的研究 | 第17-18页 |
| 2.4.6 重组δδ-ADH的复性研究 | 第18页 |
| 2.4.7 重组δδ-ADH的分离纯化 | 第18页 |
| 2.4.8 蛋白电泳及蛋白含量的测定 | 第18页 |
| 2.4.9 乙醇脱氢酶酶活的测定 | 第18-19页 |
| 2.4.10 重组δδ-ADH的酶学性质研究 | 第19页 |
| 2.4.11 游离酶动力学常数的测定 | 第19页 |
| 2.4.12 固定化材料的选择 | 第19-20页 |
| 2.4.13 固定化及后修饰条件的确定 | 第20页 |
| 2.4.14 评价酶固定化效果的指标 | 第20-21页 |
| 2.4.15 固定化酶酶学性质研究 | 第21-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-46页 |
| 3.1 大肠杆菌δδ-ADH编码基因adh7的克隆表达 | 第22-26页 |
| 3.1.1 大肠杆菌adh7基因的获得 | 第22页 |
| 3.1.2 工程菌的构建 | 第22-23页 |
| 3.1.3 重组蛋白的诱导表达 | 第23-24页 |
| 3.1.4 重组δδ-ADH诱导表达条件的优化 | 第24-26页 |
| 3.1.5 小结 | 第26页 |
| 3.2 包涵体的溶解及复性 | 第26-32页 |
| 3.2.1 包涵体溶解条件的研究 | 第26-30页 |
| 3.2.2 重组δδ-ADH的复性 | 第30-31页 |
| 3.2.3 重组δδ-ADH的分离纯化 | 第31-32页 |
| 3.2.4 小结 | 第32页 |
| 3.3 重组δδ-ADH的酶学性质研究 | 第32-36页 |
| 3.3.1 重组δδ-ADH最适作用pH及pH稳定性 | 第32-33页 |
| 3.3.2 重组δδ-ADH最适作用温度及热稳定性 | 第33-34页 |
| 3.3.3 重组δδ-ADH的乙醇耐受性 | 第34-35页 |
| 3.3.4 游离酶动力学常数的测定 | 第35页 |
| 3.3.5 小结 | 第35-36页 |
| 3.4 重组δδ-ADH的固定化 | 第36-46页 |
| 3.4.1 壳聚糖小球制备条件的优化 | 第36-38页 |
| 3.4.2 不同材料对重组δδ-ADH固定效果的比较 | 第38页 |
| 3.4.3 固定化条件的选择 | 第38-41页 |
| 3.4.4 固定化酶的酶学性质研究 | 第41-42页 |
| 3.4.5 重组δδ-ADH的固定化后修饰 | 第42-43页 |
| 3.4.6 固定化后修饰酶的酶学性质研究 | 第43-45页 |
| 3.4.7 小结 | 第45-46页 |
| 主要结论与展望 | 第46-47页 |
| 主要结论 | 第46页 |
| 展望 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51页 |
