| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-29页 |
| 1.1 免疫系统概述 | 第14页 |
| 1.2 树突状细胞的亚群 | 第14-15页 |
| 1.2.1 浆细胞样树突状细胞 | 第14页 |
| 1.2.2 传统树突状细胞 | 第14-15页 |
| 1.3 树突状细胞疫苗的分类 | 第15-16页 |
| 1.3.1 预防性DC疫苗 | 第16页 |
| 1.3.2 治疗性DC疫苗 | 第16页 |
| 1.4 树突状细胞疫苗的理论基础 | 第16-18页 |
| 1.4.1 抗原交互递呈-胞质途径 | 第17页 |
| 1.4.2 抗原交互递呈-囊泡途径 | 第17-18页 |
| 1.5 影响树突状细胞疫苗效果的主要因素 | 第18-20页 |
| 1.5.1 树突状细胞的活化状态 | 第18页 |
| 1.5.2 靶向树突状细胞受体的类型 | 第18-19页 |
| 1.5.3 佐剂 | 第19-20页 |
| 1.6 家畜树突状细胞的分类和功能研究 | 第20-23页 |
| 1.6.1 牛树突状细胞 | 第20-21页 |
| 1.6.2 羊树突状细胞 | 第21-22页 |
| 1.6.3 猪树突状细胞 | 第22-23页 |
| 1.7 家畜树突状细胞的研究方法 | 第23-25页 |
| 1.7.1 细胞表面表型和形态 | 第23-24页 |
| 1.7.2 个体发育研究 | 第24页 |
| 1.7.3 功能特征鉴定 | 第24页 |
| 1.7.4 群体基因表达模式 | 第24-25页 |
| 1.7.5 单细胞水平分子表达模式 | 第25页 |
| 1.8 抗原靶向递呈在兽用疫苗研究中的应用 | 第25-28页 |
| 1.8.1 靶向受体选择及效果评价 | 第26-27页 |
| 1.8.2 兽用靶向疫苗的研究方法和思路 | 第27-28页 |
| 1.9 靶向牛Clec9A/XCR1~+DCS递呈抗原在兽用新型疫苗研发中的应用价值 | 第28-29页 |
| 第二章 牛外周血Clec9A/XCR1受体分布及树突状细胞c DC1和cDC2亚群表型鉴定研究 | 第29-50页 |
| 2.1 材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1 抗体和磁珠 | 第29-30页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第30页 |
| 2.1.3 主要试剂及溶液 | 第30-31页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第31页 |
| 2.2 方法 | 第31-40页 |
| 2.2.1 牛EDTA抗凝血制备 | 第31页 |
| 2.2.2 牛PBMCs分离 | 第31-32页 |
| 2.2.3 牛Clec9A、XCR1基因克隆及序列分析 | 第32-36页 |
| 2.2.4 磁珠分选牛血液中单核细胞、B细胞、CD4~+T细胞、CD8~+ T细胞、WC1~+γδT细胞及CD335~+ NK细胞群体 | 第36-37页 |
| 2.2.5 磁珠分选牛血液中lin-各细胞群体 | 第37页 |
| 2.2.6 磁珠分选牛血液中CD26~+ DCs | 第37-38页 |
| 2.2.7 流式分选牛血液中CD26~+ DCs和CD172~+ DCs亚群 | 第38页 |
| 2.2.8 qRT-PCR分析牛Clce9A、XCR1在血液细胞群体中分布 | 第38-39页 |
| 2.2.9 六色流式分析牛树突状细胞亚群 | 第39-40页 |
| 2.2.10 趋化实验 | 第40页 |
| 2.3 结果 | 第40-48页 |
| 2.3.1 牛Clec9A、XCR1基因的鉴定 | 第40-41页 |
| 2.3.2 牛Clec9A、XCR1基因的分子特征 | 第41-43页 |
| 2.3.3 牛Clec9A、XCR1共同分布于一类CD26~+CD205~+CADM1~+MHCⅡ~+CD11b-lin- DCs | 第43-45页 |
| 2.3.4 牛Clec9A/XCR1~+ DC属于一类传统的DCs | 第45-46页 |
| 2.3.5 鼠XCL1能趋化牛XCR1~+ DC的迁移 | 第46-47页 |
| 2.3.6 牛血液CD26~+CD172a-CD11c~+MHCⅡ~+lin- DC和CD172a~+ CD26-CD11c~+MHC Ⅱ~+lin- DC分别代表cDC1和cDC2 | 第47-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 牛外周血XCL1分布及其C-C序列结合XCR1~+DC特征研究 | 第50-59页 |
| 3.1 材料和方法 | 第50-53页 |
| 3.1.1 抗体和磁珠、实验动物、主要试剂及溶液、仪器设备 | 第50页 |
| 3.1.2 引物设计和合成 | 第50页 |
| 3.1.3 牛XCL1基因的克隆 | 第50-51页 |
| 3.1.3.1 目的基因的PCR扩增 | 第50-51页 |
| 3.1.3.2 回收、连接pEASY-T1载体、转化及重组质粒鉴定 | 第51页 |
| 3.1.3.3 基因测序 | 第51页 |
| 3.1.3.4 基因序列分析 | 第51页 |
| 3.1.4 磁珠分选牛血液中单核细胞、B细胞、CD4~+ T细胞、CD8~+ T细胞、WC1~+ γδT细胞、CD335~+ NK细胞以及lin-细胞 | 第51页 |
| 3.1.5 细胞体外刺激 | 第51页 |
| 3.1.6 牛XCL1和XCR1蛋白的 3D结构模拟 | 第51页 |
| 3.1.7 不同长度牛XCL1截短蛋白的化学合成 | 第51-52页 |
| 3.1.8 磁珠负筛验证牛XCL1截短蛋白结合XCR1~+DC的能力 | 第52-53页 |
| 3.1.9 qRT-PCR分析 | 第53页 |
| 3.2 结果 | 第53-58页 |
| 3.2.1 牛XCL1基因鉴定和分子特征 | 第53-55页 |
| 3.2.2 牛XCL1主要分布在血液中静息NK细胞和活化的CD8~+ T细胞 | 第55-56页 |
| 3.2.3 牛XCL1和XCR1的 3D结构模拟和表面电势分布特点 | 第56页 |
| 3.2.4 XCL1中二硫键片段是结合XCR1受体的关键区域 | 第56-58页 |
| 3.3 讨论 | 第58-59页 |
| 第四章 牛XCL1介导的靶向树突状细胞免疫效力研究 | 第59-74页 |
| 4.1 材料和方法 | 第59-63页 |
| 4.1.1 质粒、细胞、抗体及主要试剂 | 第59页 |
| 4.1.2 分子设计牛XCL1融合的FMDV多表位重组抗原 | 第59-60页 |
| 4.1.3 制备XCL-OB7和~ΔXCL-OB7融合蛋白 | 第60-61页 |
| 4.1.4 SDS-PAGE和Western blot | 第61页 |
| 4.1.4.1 SDS-PAGE | 第61页 |
| 4.1.4.2 Western blot | 第61页 |
| 4.1.5 体外验证XCL-OB7和ΔXCL-OB7结合XCR1~+ DC的能力 | 第61-62页 |
| 4.1.6 DC靶向疫苗的制备 | 第62页 |
| 4.1.7 动物实验 | 第62-63页 |
| 4.1.8 ELISA | 第63页 |
| 4.1.9 病毒交叉中和实验 | 第63页 |
| 4.1.10 统计分析 | 第63页 |
| 4.2 结果 | 第63-71页 |
| 4.2.1 融合蛋白XCL-OB7和~ΔXCL-OB7的表达和鉴定 | 第63-64页 |
| 4.2.2 XCL-OB7能特异性结合分选的CD26~+DCs中XCR1~+ DC | 第64-67页 |
| 4.2.3 XCL-OB7明显提高了总IgG抗体应答 | 第67-68页 |
| 4.2.4 poly（I:C）抑制了XCL-OB7诱导的IgG抗体应答 | 第68页 |
| 4.2.5 病毒中和抗体也指示在诱导抗体应答上poly（I:C）和XCL1起到相反作用 | 第68-70页 |
| 4.2.6 免疫poly（I:C）和~ΔXCL-OB7动物在攻毒后FMDV NS抗体显著降低 | 第70页 |
| 4.2.7 攻毒保护率 | 第70-71页 |
| 4.3 讨论 | 第71-74页 |
| 第五章 抗体介导的靶向Clec9A/XCR1~+树突状细胞方法研究 | 第74-83页 |
| 5.1 材料和方法 | 第74-76页 |
| 5.1.1 质粒、细胞、抗体及主要试剂 | 第74页 |
| 5.1.2 表达XCR1保外区融合蛋白XCR1（ETC） | 第74页 |
| 5.1.3 制备XCR1小鼠单抗 | 第74页 |
| 5.1.4 制备牛Clec9A小鼠单抗 | 第74-75页 |
| 5.1.5 免疫荧光实验 | 第75页 |
| 5.1.6 激光共聚焦实验 | 第75页 |
| 5.1.7 流式细胞术分析 | 第75-76页 |
| 5.1.8 磁珠缺失筛选实验 | 第76页 |
| 5.2 结果 | 第76-81页 |
| 5.2.1 融合蛋白XCR1（ETC）、XCR1(ETC)-SUMO的表达和鉴定 | 第76-77页 |
| 5.2.2 XCR1单抗能与体外转染XCR1-CHO-K1反应 | 第77-78页 |
| 5.2.3 XCR1正确表达在CHO-K1细胞表面 | 第78-80页 |
| 5.2.4 XCR1单抗未能结合血液中XCR1~+ DC | 第80页 |
| 5.2.5 牛Clec9A单抗能够结合血液中Clec9A~+ DC | 第80-81页 |
| 5.3 讨论 | 第81-83页 |
| 第六章 全文结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-96页 |
| 附录 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 作者简历 | 第99页 |
