| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 一、引言 | 第13-27页 |
| 1.1 拟南芥表皮毛发育 | 第13-16页 |
| 1.1.1 拟南芥表皮毛发育起始模式 | 第13-14页 |
| 1.1.2 拟南芥表皮毛发育相关的基因 | 第14-15页 |
| 1.1.3 拟南芥表皮毛发育的调控机制 | 第15-16页 |
| 1.2 棉花纤维发育 | 第16-18页 |
| 1.1.1 棉纤维发育过程 | 第16-17页 |
| 1.1.2 棉纤维发育机制 | 第17-18页 |
| 1.3 磷脂酸(PA) | 第18-26页 |
| 1.3.1 磷脂酸(PA)的结构特征 | 第19页 |
| 1.3.2 植物中磷脂酸(PA)水平的动态变化 | 第19-20页 |
| 1.3.3 磷脂酸(PA)的生物合成途径 | 第20-21页 |
| 1.3.4 磷脂酸(PA)的调控 | 第21-22页 |
| 1.3.5 磷脂酸(PA)的降解途径 | 第22页 |
| 1.3.6 磷脂酸(PA)的功能 | 第22-23页 |
| 1.3.7 磷脂酸(PA)的功能及作用机制 | 第23-26页 |
| 1.4 立题依据及研究意义 | 第26-27页 |
| 二、实验材料 | 第27-30页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 载体和菌种 | 第27页 |
| 2.1.3 工具酶及药品试剂 | 第27页 |
| 2.1.4 常用储存液和缓冲液 | 第27-28页 |
| 2.1.5 本论文所用培养基 | 第28-30页 |
| 三、实验方法 | 第30-38页 |
| 3.1 GhHOX4四个截短蛋白表达载体构建 | 第30-31页 |
| 3.2 原核重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第31-33页 |
| 3.2.1 重组蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| 3.2.2 重组蛋白的可溶性验证 | 第32页 |
| 3.2.3 重组蛋白的分离纯化 | 第32-33页 |
| 3.3 Lipid-Protein Blotting | 第33页 |
| 3.4 磷脂酸PA喷洒处理拟南芥以及叶片表皮毛洗脱 | 第33-34页 |
| 3.5 CTAB法提取棉花基因组DNA | 第34页 |
| 3.6 PCR检测GhHOX4转基因棉花gDNA | 第34-35页 |
| 3.7 GhHOX4转基因棉花表达分析 | 第35-37页 |
| 3.7.1 棉纤维材料收取 | 第35页 |
| 3.7.2 棉纤维RNA提取 | 第35-36页 |
| 3.7.3 棉纤维RNA完整性、浓度检测及逆转录 | 第36页 |
| 3.7.4 PCR检测cDNA的质量 | 第36页 |
| 3.7.5 qRT-PCR分析表达量 | 第36-37页 |
| 3.8 棉花离体胚珠培养 | 第37-38页 |
| 四、实验结果 | 第38-54页 |
| 4.1 pH对PA与GhHOX4体外互作的影响 | 第38页 |
| 4.2 GhHOX4关键结构域分析及截短蛋白片段的设计 | 第38-39页 |
| 4.3 GhHOX4截短蛋白片段的表达纯化 | 第39-43页 |
| 4.3.1 GhHOX4截短蛋白表达载体构建 | 第39页 |
| 4.3.2 GhHOX4-HD-MBP融合蛋白诱导及纯化 | 第39-40页 |
| 4.3.3 GhHOX4-ZLZ-His融合蛋白诱导及纯化 | 第40-41页 |
| 4.3.4 GhHOX4 START-MBP融合蛋白诱导及纯化 | 第41-42页 |
| 4.3.5 GhHOX4 SAD-MBP融合蛋白诱导及纯化 | 第42-43页 |
| 4.4 四个GhHOX4截短蛋白与磷脂酸(PA)的互作 | 第43-44页 |
| 4.5 PA与GhHOX4互作的位点的精细化 | 第44-46页 |
| 4.5.1 GhHOX4 START区域的定点突变 | 第44页 |
| 4.5.2 GhHOX4-START点突变蛋白诱导 | 第44-45页 |
| 4.5.3 GhHOX4-START点突变蛋白不与PA互作 | 第45-46页 |
| 4.6 PA与GhHOX4互作对转基因拟南芥的表型影响 | 第46-48页 |
| 4.6.1 体外PA处理GhHOX4转基因拟南芥使表皮毛数量减少 | 第46-47页 |
| 4.6.2 体外PA处理GhHOX4转基因拟南芥使表皮毛四分支比例减少 | 第47-48页 |
| 4.7 GhHOX4转基因棉花的鉴定与初步分析 | 第48-54页 |
| 4.7.1 GhHOX4转基因棉花 | 第48-49页 |
| 4.7.2 gDNA水平鉴定GhHOX4转基因棉花阳性苗 | 第49-50页 |
| 4.7.3 GhHOX4 RNAi转基因棉花的表达量分析 | 第50-51页 |
| 4.7.4 GhHOX4 RNAi胚珠体外培养 | 第51-52页 |
| 4.7.5 GhHOX4 RNAi棉纤维表型分析 | 第52页 |
| 4.7.6 外源PA处理棉花胚珠 | 第52-54页 |
| 五、讨论 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 硕士期间发表的学术论文 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
