| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 研究进展 | 第11-19页 |
| 1.1 病原 | 第11-12页 |
| 1.1.1 培养特性 | 第11页 |
| 1.1.2 APP分型 | 第11-12页 |
| 1.2 流行特点 | 第12页 |
| 1.3 发病机理 | 第12-13页 |
| 1.4 APP主要毒力因子 | 第13-15页 |
| 1.4.1 脂多糖（LPS） | 第13页 |
| 1.4.2 溶血素(Hly) | 第13-14页 |
| 1.4.3 外膜蛋白(OMP) | 第14页 |
| 1.4.4 转铁结合蛋白 | 第14-15页 |
| 1.4.5 荚膜 | 第15页 |
| 1.5 APP检测方法 | 第15-16页 |
| 1.5.1 根据流行病学及特征临床症状 | 第15页 |
| 1.5.2 细菌学检查 | 第15页 |
| 1.5.3 血清学试验 | 第15-16页 |
| 1.5.4 分子生物学诊断 | 第16页 |
| 1.6 防治 | 第16-18页 |
| 1.6.1 治疗 | 第16-17页 |
| 1.6.2 疫苗 | 第17-18页 |
| 1.7 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白D（OmpD）部分基因序列分析与克隆表达 | 第19-39页 |
| 2.1 材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 主要生化试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.1.4 培养基的配制 | 第20-21页 |
| 2.1.5 琼脂糖凝胶电泳试剂配制 | 第21页 |
| 2.1.6 碱裂解法小量质粒提取试剂配制 | 第21页 |
| 2.1.7 SDS-PAGE试剂配制 | 第21-22页 |
| 2.1.8 蛋白表达试剂 | 第22页 |
| 2.1.9 包涵体蛋白的超声破碎与洗涤试剂配制 | 第22页 |
| 2.1.10 蛋白复性试剂配制 | 第22页 |
| 2.1.11 Western-blot试剂配制 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-29页 |
| 2.2.0 引物设计 | 第23页 |
| 2.2.1 APP PCR鉴定引物 | 第23页 |
| 2.2.2 APP的复苏及其DNA提取 | 第23页 |
| 2.2.3 D15/omp基因的克隆 | 第23页 |
| 2.2.4 目的片段的回收 | 第23页 |
| 2.2.5 目的基因T-A克隆 | 第23-24页 |
| 2.2.6 重组克隆菌的鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.7 APP D15/omp基序列分析 | 第25页 |
| 2.2.8 重组表达质粒pET32a-ompD的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.9 重组表达菌的鉴定 | 第26页 |
| 2.2.10 pET32a-ompD蛋白的诱导表达 | 第26-28页 |
| 2.2.11 纯化与复性 | 第28-29页 |
| 2.2.12 浓度的测定 | 第29页 |
| 2.2.13 重组蛋白Western blot分析 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-37页 |
| 2.3.1 APP的复苏及染色 | 第29-30页 |
| 2.3.2 PCR最佳退火温度优化与目的基因的扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.3 重组克隆质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.4 APP D/15omp序列分析 | 第32-34页 |
| 2.3.5 重组表达质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.6 重组蛋白的表达 | 第35-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 ApxⅣA间接ELISA方法优化与初步应用 | 第39-50页 |
| 3.1 材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 重组质粒与菌株 | 第39页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第39-40页 |
| 3.1.4 培养基的配制 | 第40页 |
| 3.1.5 ELISA试剂配制 | 第40页 |
| 3.2 方法 | 第40-43页 |
| 3.2.1 包被抗原（重组Apx IVA蛋白）的制备 | 第40-41页 |
| 3.2.2 间接ELISA操作步骤 | 第41页 |
| 3.2.3 抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第41页 |
| 3.2.4 封闭液的确定 | 第41-42页 |
| 3.2.5 血清反应时间的确定 | 第42页 |
| 3.2.6 酶标二抗稀释度的确定 | 第42页 |
| 3.2.7 酶标二抗反应时间的确定 | 第42页 |
| 3.2.8 阴、阳性血清临界值的确定 | 第42页 |
| 3.2.9 特异性试验 | 第42页 |
| 3.2.10 重复性试验 | 第42-43页 |
| 3.2.11 稳定性试验 | 第43页 |
| 3.2.12 初步应用 | 第43页 |
| 3.3 结果 | 第43-48页 |
| 3.3.1 重组Apx IVA蛋白的制备 | 第43页 |
| 3.3.2 抗原包被浓度及血清稀释倍数的确定 | 第43-44页 |
| 3.3.3 封闭液的确定 | 第44-45页 |
| 3.3.4 血清反应时间的确定 | 第45页 |
| 3.3.5 酶标二抗稀释度的确定 | 第45-46页 |
| 3.3.6 酶标二抗反应时间的确定 | 第46页 |
| 3.3.7 间接ELISA阴、阳性血清临界值的确定 | 第46页 |
| 3.3.8 特异性试验 | 第46-47页 |
| 3.3.9 重复性试验 | 第47页 |
| 3.3.10 稳定性试验 | 第47-48页 |
| 3.3.11 初步应用 | 第48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 猪胸膜肺炎放线杆菌亚单位疫苗对昆明小鼠保护力的初步研究 | 第50-55页 |
| 4.1 材料 | 第50页 |
| 4.1.1 重组表达蛋白和试验动物 | 第50页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第50页 |
| 4.2 方法 | 第50-52页 |
| 4.2.1 动物分组及免疫 | 第50-51页 |
| 4.2.2 疫苗制备 | 第51页 |
| 4.2.3 半数致死量的测定 | 第51页 |
| 4.2.4 小鼠血清中特异性抗体水平 | 第51页 |
| 4.2.5 小鼠免疫保护试验 | 第51-52页 |
| 4.3 结果 | 第52-53页 |
| 4.3.1 半数致死量 | 第52页 |
| 4.3.2 血清中特异性抗体水平 | 第52页 |
| 4.3.3 小鼠保护力 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-55页 |
| 全文总结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第65页 |
