| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-14页 |
| 1.1 立题意义 | 第9-10页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第10-13页 |
| 1.2.1 毕赤酵母表达系统概论 | 第10-11页 |
| 1.2.2 毕赤酵母转录组研究进展 | 第11页 |
| 1.2.3 碳源对毕赤酵母代谢的影响 | 第11-12页 |
| 1.2.4 外源蛋白表达对毕赤酵母代谢的影响 | 第12页 |
| 1.2.5 伴侣蛋白对蛋白表达的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 本课题研究思路和内容 | 第13-14页 |
| 1.3.1 课题研究思路 | 第13页 |
| 1.3.2 课题研究内容 | 第13页 |
| 1.3.3 课题来源 | 第13-14页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第14-21页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-15页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第14页 |
| 2.1.2 培养基与溶液 | 第14页 |
| 2.1.3 主要试剂与仪器 | 第14-15页 |
| 2.2 实验方法 | 第15-21页 |
| 2.2.1 菌株发酵培养方法 | 第15-16页 |
| 2.2.2 样品采集方法 | 第16页 |
| 2.2.3 生物量测定 | 第16页 |
| 2.2.4 蛋白含量测定 | 第16页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE分析法 | 第16页 |
| 2.2.6 磷脂酶活力测定 | 第16页 |
| 2.2.7 毕赤酵母转录组建库测序 | 第16-17页 |
| 2.2.8 毕赤酵母生物信息分析流程 | 第17页 |
| 2.2.9 荧光定量PCR法测定mRNA转录水平 | 第17-18页 |
| 2.2.10 共表达热激蛋白相关基因菌株的构建 | 第18-19页 |
| 2.2.11 共表达核糖体蛋白相关基因菌株的构建 | 第19页 |
| 2.2.12 毕赤酵母摇瓶发酵方法 | 第19-20页 |
| 2.2.13 脯氨酰内肽酶酶活力测定方法 | 第20-21页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第21-55页 |
| 3.1 毕赤酵母分批发酵结果 | 第21-22页 |
| 3.2 转录组数据总体分析及荧光定量PCR验证 | 第22-24页 |
| 3.2.1 转录组测序及组装结果 | 第22-23页 |
| 3.2.2 荧光定量PCR验证转录数据 | 第23-24页 |
| 3.3 甘油培养和甲醇诱导条件对毕赤酵母基因表达的影响 | 第24-32页 |
| 3.3.1 甘油培养和甲醇诱导条件下差异表达mRNA的GO和KEGG富集分析 | 第24-26页 |
| 3.3.2 甘油培养和甲醇诱导条件下毕赤酵母甲醇代谢途径差异 | 第26-28页 |
| 3.3.3 甘油培养和甲醇诱导条件下毕赤酵母糖酵解途径和柠檬酸循环代谢差异 | 第28-30页 |
| 3.3.4 甘油培养和甲醇诱导条件下毕赤酵母乙醛酸循环代谢差异 | 第30页 |
| 3.3.5 甘油培养和甲醇诱导条件下毕赤酵母磷酸戊糖途径代谢差异 | 第30-31页 |
| 3.3.6 甘油培养和甲醇诱导条件下毕赤酵母蛋白质加工过程基因代谢差异 | 第31-32页 |
| 3.3.7 小结 | 第32页 |
| 3.4 磷脂酶A_2基因拷贝数对毕赤酵母基因表达的影响 | 第32-44页 |
| 3.4.1 不同磷脂酶A_2基因拷贝毕赤酵母菌株显著变化基因 | 第33-34页 |
| 3.4.2 不同磷脂酶A_2基因拷贝数菌株差异mRNA的GO和KEGG富集分析 | 第34-39页 |
| 3.4.3 热激蛋白对重组毕赤酵母代谢的影响 | 第39-40页 |
| 3.4.4 不同磷脂酶A_2基因拷贝数重组毕赤酵母碳代谢差异 | 第40-41页 |
| 3.4.5 不同磷脂酶A_2基因拷贝数对重组毕赤酵母蛋白加工基因差异表达的影响 | 第41-43页 |
| 3.4.6 小结 | 第43-44页 |
| 3.5 毕赤酵母共表达热激蛋白相关基因的研究 | 第44-49页 |
| 3.5.1 构建含有热激蛋白相关基因的重组菌株 | 第44页 |
| 3.5.2 产磷脂酶A_2重组菌株共表达热激蛋白相关基因的摇瓶发酵 | 第44-46页 |
| 3.5.3 产脯氨酰内肽酶重组菌株共表达热激蛋白相关基因的摇瓶发酵 | 第46-47页 |
| 3.5.4 产磷脂酶A_2重组菌株共表达热激蛋白相关基因转录水平分析 | 第47-48页 |
| 3.5.5 共表达热激蛋白提高磷脂酶A_2和脯氨酰内肽酶的机理分析 | 第48-49页 |
| 3.6 毕赤酵母共表达核糖体蛋白相关基因的研究 | 第49-55页 |
| 3.6.1 构建含有核糖体相关基因的重组菌株 | 第49-50页 |
| 3.6.2 产磷脂酶A_2重组菌株共表达核糖体相关基因的摇瓶发酵结果 | 第50-51页 |
| 3.6.3 产脯氨酰内肽酶重组菌株共表达核糖体基因的摇瓶发酵结果 | 第51-52页 |
| 3.6.4 共表达核糖体相关基因重组菌株转录水平分析 | 第52-53页 |
| 3.6.5 共表达核糖体蛋白提高磷脂酶A_2和脯氨酰内肽酶的机理分析 | 第53-55页 |
| 主要结论及展望 | 第55-57页 |
| 主要结论 | 第55-56页 |
| 展望 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录1 | 第63-67页 |
| 附录2：作者在攻读硕士期间发表的论文 | 第67页 |
