| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-17页 |
| 一、晚期卵巢癌的研究现状 | 第13页 |
| 二、肿瘤免疫治疗的研究现状 | 第13-15页 |
| （一）以间皮素为靶点的治疗进展 | 第14页 |
| （二）mesoCAR-T的研究进展 | 第14-15页 |
| 三、其它肿瘤免疫治疗 | 第15-16页 |
| 四、本课题的研究内容 | 第16-17页 |
| 第一部分 靶向间皮素的嵌合型抗原受体修饰的T细胞的构建 | 第17-28页 |
| 一、材料和方法 | 第17-19页 |
| （一）实验材料 | 第17页 |
| （二）实验试剂 | 第17-18页 |
| （三）实验仪器 | 第18页 |
| （四）所需的引物 | 第18-19页 |
| （五）实验主要溶液的配制 | 第19页 |
| 二、实验方法 | 第19-25页 |
| （一）pNBS328-pGH-meso质粒的构建 | 第20页 |
| （二）酶切、连接、转化 | 第20-22页 |
| （三）电转获得稳定表达mesoCAR的T细胞 | 第22-23页 |
| （四）T细胞中meso CAR的表达的检测 | 第23-25页 |
| 三、实验结果 | 第25-27页 |
| （一） mesoCAR基因结构示意图及质粒构建结果 | 第25页 |
| （二） mesoCAR基因转染效率检测结果 | 第25-27页 |
| 四、结果分析与讨论 | 第27-28页 |
| 第二部分 间皮素高表达的卵巢癌细胞株的筛选 | 第28-35页 |
| 一、实验器材 | 第28-29页 |
| （一）实验仪器 | 第28页 |
| （二）实验试剂 | 第28-29页 |
| （三）实验试剂配置 | 第29页 |
| 二、实验方法 | 第29-32页 |
| （一）细胞复苏 | 第29-30页 |
| （二）细胞培养及传代 | 第30页 |
| （三） Q-PCR检测各细胞系中间皮素的表达 | 第30-31页 |
| （四） Western Bolt检测细胞系中间皮素的表达 | 第31页 |
| （五）流式检测两种卵巢癌细胞株中间皮素的表达 | 第31-32页 |
| 三、实验结果 | 第32-33页 |
| （一）Q-PCR检测各种肿瘤细胞株间皮素抗原的表达情况 | 第32页 |
| （二）各肿瘤细胞株间皮素抗原的WB检测结果 | 第32-33页 |
| （三）五种卵巢癌细胞株间皮素抗原表达的流式结果 | 第33页 |
| 四、结果分析与讨论 | 第33-35页 |
| 第三部分 mesoCAR-T细胞的功能分析 | 第35-48页 |
| 一、实验器材 | 第35页 |
| （一）实验仪器 | 第35页 |
| （二）实验材料 | 第35页 |
| 二、实验方法 | 第35-38页 |
| （一） 流式检测抗原刺激后mesoCAR-T细胞的表型 | 第35-36页 |
| （二） 流式检测mesoCAR-T细胞因子分泌情况 | 第36页 |
| （三）检测mesoCAR-T细胞对卵巢癌细胞的体外杀伤能力 | 第36-37页 |
| （四） LDH法检测mesoCAR-T细胞对卵巢癌细胞的杀伤能力 | 第37页 |
| （五）流式检测共培养条件下mesoCAR-T细胞的细胞因子分泌情况 | 第37-38页 |
| （六）荧光素酶报告基因检测卵巢癌细胞杀伤 | 第38页 |
| 三、实验结果 | 第38-46页 |
| （一）流式检测抗原刺激下mesoCAR-T细胞的表型 | 第38-39页 |
| （二）实时监测系统检测mesoCAR-T细胞对五种卵巢癌肿瘤细胞株的杀伤作用 | 第39-42页 |
| （三）实时监测系统检测meso CAR-T细胞对两株卵巢癌肿瘤细胞株的杀伤作用 | 第42-43页 |
| （四）荧光素酶报告基因检测卵巢癌细胞杀伤情况 | 第43-44页 |
| （五） LDH法检测meso CAR-T细胞对卵巢癌肿瘤细胞株的杀伤作用 | 第44页 |
| （六）检测mesoCAR-T细胞因子的流式结果 | 第44-45页 |
| （七）mesoCAR-T细胞与卵巢癌肿瘤细胞共培养后细胞因子的分泌情况 | 第45-46页 |
| 四、结果和讨论 | 第46-48页 |
| 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 综述 | 第53-61页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 在读硕士期间发表的论文及参加科研情况 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
