| 英文缩略词 | 第5-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-21页 |
| 1.1 乳腺 | 第13-14页 |
| 1.1.1 乳腺的结构和功能 | 第13页 |
| 1.1.2 乳腺的发育和泌乳过程 | 第13页 |
| 1.1.3 泌乳周期内乳腺细胞的增殖和凋亡 | 第13-14页 |
| 1.2 细胞周期 | 第14-17页 |
| 1.2.1 细胞周期时顺调控机制 | 第14-17页 |
| 1.2.2 细胞周期监控机制 | 第17页 |
| 1.3 MEN1基因研究进展 | 第17-21页 |
| 1.3.1 MEN1基因概述 | 第17-18页 |
| 1.3.2 Menin与转录调节 | 第18页 |
| 1.3.3 Menin与基因组稳定 | 第18-19页 |
| 1.3.4 Menin与细胞增殖 | 第19-20页 |
| 1.3.5 Menin与细胞凋亡 | 第20页 |
| 1.3.6 Menin与细胞周期 | 第20-21页 |
| 1.4 Menin与乳腺 | 第21页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 奶牛乳腺组织 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂及来源 | 第22-23页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-38页 |
| 2.2.1 奶牛MEN1基因过表达载体的构建 | 第23-27页 |
| 2.2.2 siRNA的构建 | 第27页 |
| 2.2.3 无内毒素质粒大量提取 | 第27-28页 |
| 2.2.4 奶牛乳腺上皮细胞系的培养 | 第28-29页 |
| 2.2.5 中国仓鼠卵巢细胞(CHO)培养 | 第29页 |
| 2.2.6 小鼠成肌细胞(C2C12)培养 | 第29页 |
| 2.2.7 奶牛乳腺上皮细胞的生物学性状检测 | 第29-30页 |
| 2.2.8 转染奶牛乳腺上皮细胞系 | 第30页 |
| 2.2.9 转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO) | 第30-31页 |
| 2.2.10 转染小鼠成肌细胞(C2C12) | 第31页 |
| 2.2.11 组织/细胞总RNA提取与检测 | 第31-33页 |
| 2.2.12 荧光定量PCR | 第33-35页 |
| 2.2.13 Western blot | 第35-37页 |
| 2.2.14 CCK-8法检测细胞增殖 | 第37页 |
| 2.2.15 流式细胞术检测细胞周期 | 第37-38页 |
| 2.3 统计分析 | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-58页 |
| 3.1 不同泌乳阶段奶牛乳腺组织MEN1/menin的表达分析 | 第38-40页 |
| 3.1.1 不同泌乳阶段奶牛乳腺组织MEN1 mRNA的表达分析 | 第38-39页 |
| 3.1.2 不同泌乳阶段奶牛乳腺组织menin蛋白的表达分析 | 第39页 |
| 3.1.3 不同泌乳阶段奶牛乳腺组织menin蛋白的表达部位分析 | 第39-40页 |
| 3.2 奶牛MEN1基因真核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 3.2.1 MEN1基因的PCR扩增结果 | 第40-41页 |
| 3.2.2 重组载体的酶切鉴定 | 第41页 |
| 3.2.3 重组质粒的测序鉴定 | 第41页 |
| 3.3 奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)的生物学性状检测 | 第41-43页 |
| 3.3.1 奶牛乳腺上皮细胞的形态观察 | 第41-42页 |
| 3.3.2 奶牛乳腺上皮细胞生长曲线 | 第42-43页 |
| 3.4 真核细胞奶牛Menin过表达转染体系的建立 | 第43-48页 |
| 3.4.1 MAC-T细胞转染pcDNA3.1-Myc-His-bmen1载体最佳条件的确定 | 第43-44页 |
| 3.4.2 CHO细胞转染pcDNA3.1-Myc-His-bmen1载体最佳条件的确定 | 第44-46页 |
| 3.4.3 C2C12细胞转染pcDNA3.1-Myc-His-bmen1载体最佳条件的确定 | 第46-48页 |
| 3.5 MAC-T细胞中转染siRNA条件的确定 | 第48-52页 |
| 3.5.1 MAC-T细胞转染siRNA后MEN1 mRNA的表达分析 | 第50页 |
| 3.5.2 MAC-T细胞转染siRNA后Menin蛋白的表达分析 | 第50-52页 |
| 3.6 Menin过表达对MAC-T细胞的影响 | 第52-54页 |
| 3.6.1 Menin过表达对MAC-T细胞增殖的影响 | 第52页 |
| 3.6.2 Menin过表达对MAC-T细胞周期的影响 | 第52-54页 |
| 3.6.3 Menin过表达对细胞周期相关因子的表达分析 | 第54页 |
| 3.7 Menin限量表达对MAC-T细胞的影响 | 第54-58页 |
| 3.7.1 Menin限量表达对MAC-T细胞增殖的影响 | 第54-55页 |
| 3.7.2 Menin限量表达对MAC-T细胞周期的影响 | 第55-57页 |
| 3.7.3 Menin限量表达对细胞周期相关因子的表达分析 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 MEN1/Menin在奶牛不同生理阶段的乳腺组织中的表达 | 第58-59页 |
| 4.2 真核细胞中奶牛MEN1/Menin过表达转染体系的建立 | 第59页 |
| 4.3 Menin过表达对细胞的影响 | 第59-60页 |
| 4.4 Menin限量表达对细胞的影响 | 第60-61页 |
| 5 结论与研究展望 | 第61-63页 |
| 5.1 结论 | 第61页 |
| 5.2 创新点 | 第61页 |
| 5.3 研究展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
