| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第10-24页 |
| 1 海洋细菌群体感应研究概述 | 第10-12页 |
| 1.1 群体感应系统的信号分子及其调控功能 | 第10-11页 |
| 1.2 LuxI/R型群体感应系统的调控机制及其基因 | 第11-12页 |
| 2 有毒赤潮藻危害和防治 | 第12-15页 |
| 2.1 有毒赤潮的危害 | 第12-13页 |
| 2.2 有毒赤潮的防治 | 第13-14页 |
| 2.3 细菌群体感应与赤潮生消的调控 | 第14-15页 |
| 3 基因编辑技术研究进展 | 第15-17页 |
| 3.1 ZFN技术 | 第15-16页 |
| 3.2 Talen技术 | 第16页 |
| 3.3 归巢核酸内切酶技术 | 第16-17页 |
| 4 新兴基因编辑技术CRISPR/Cas9简述 | 第17-21页 |
| 4.1 CRISPR/Cas的发现 | 第17页 |
| 4.2 CRISPR/Cas的基因座结构 | 第17-18页 |
| 4.3 CRISPR/Cas系统的作用机制及分类 | 第18-20页 |
| 4.4 CRISPR/Cas系统的应用 | 第20-21页 |
| 5. 本文研究的目的和意义 | 第21-24页 |
| 第二章 抑藻细菌PD-2中群体感应同源基因的探明 | 第24-42页 |
| 1 前言 | 第24页 |
| 2 实验部分 | 第24-29页 |
| 2.1 实验材料及仪器试剂 | 第24-27页 |
| 2.2.实验方法 | 第27-29页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第29-40页 |
| 3.1 细菌PD-2中luxI/R同源基因序列的分析 | 第29-31页 |
| 3.2 对zlaI/R蛋白和zlbI/R蛋白的同源性对比结果 | 第31-35页 |
| 3.3 PD-2 产生信号分子的分析结果 | 第35-38页 |
| 3.4 Ponticoccus sp. PD-2 的luxI同源基因的异源表达 | 第38-40页 |
| 4. 本章小结 | 第40-42页 |
| 第三章 海洋抑藻细菌Ponticoccus sp.PD-2 AHLs产生特性及抑藻活性研究 | 第42-52页 |
| 1 前言 | 第42-43页 |
| 2 实验部分 | 第43-47页 |
| 2.1 实验材料及仪器试剂 | 第43-46页 |
| 2.2 实验方法 | 第46-47页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第47-50页 |
| 3.1 β-环糊精对菌株PD-2生长的影响 | 第47-49页 |
| 3.2 不同培养条件下的PD-2对不同赤潮藻的抑藻活性 | 第49-50页 |
| 4. 本章小结 | 第50-52页 |
| 第四章 基于CRISPR/Cas9技术的luxI同源基因的敲除及其调控抑藻功能的研究 | 第52-70页 |
| 1 前言 | 第52页 |
| 2 实验部分 | 第52-63页 |
| 2.1 实验材料与培养条件 | 第52-53页 |
| 2.2 本研究中所用引物 | 第53-54页 |
| 2.3 实验方法 | 第54-63页 |
| 2.3.1 大肠杆菌及PD-2的培养 | 第54页 |
| 2.3.2 基因组DNA的制备 | 第54页 |
| 2.3.3 质粒的制备 | 第54页 |
| 2.3.4 凝胶及PCR产物回收 | 第54页 |
| 2.3.5 CRISPR/Cas质粒构建及转化 | 第54-58页 |
| 2.3.6 电转化及突变体的鉴定 | 第58-59页 |
| 2.3.7 pTargetF-zlaI-spacer质粒和zlaI同源臂片段共转化含有pCas质粒的PD-2菌株 | 第59-60页 |
| 2.3.8 zlaI转化子的鉴定 | 第60-61页 |
| 2.3.9 pTargetF-zlaI-spacer质粒的消除 | 第61页 |
| 2.3.10 pTargetF-zlbI-spacer质粒和的zlbI同源片段共转化含有zlaI缺失的PD-2菌株 | 第61页 |
| 2.3.11 zlbI转化子的鉴定 | 第61-62页 |
| 2.3.12 质粒的消除 | 第62-63页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第63-67页 |
| 3.1 重组质粒的构建 | 第63页 |
| 3.2 线性pTargetF-spacer缺口的修复 | 第63-64页 |
| 3.3 zlaI和zlbI基因同源片段的扩增 | 第64页 |
| 3.4 缺失突变菌的鉴定 | 第64-66页 |
| 3.5 基于TLC生物自显影探究敲除luxI同源基因PD-2中AHLs的种类 | 第66-67页 |
| 3.6 抑藻实验结果 | 第67页 |
| 4 本节小结 | 第67-70页 |
| 第五章 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 在读期间发表论文 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
