| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第16-30页 |
| 1.1 小肠结肠炎耶尔森菌 | 第16-17页 |
| 1.2 细菌细胞壁的合成与细胞壁循环 | 第17-21页 |
| 1.2.1 细菌细胞壁 | 第17页 |
| 1.2.2 青霉素结合蛋白 | 第17-19页 |
| 1.2.3 肽聚糖的合成与水解 | 第19-20页 |
| 1.2.4 细菌的细胞壁循环 | 第20-21页 |
| 1.3 β-内酰胺类抗生素 | 第21-28页 |
| 1.3.1 β-内酰胺类抗生素的作用机制 | 第22页 |
| 1.3.2 细菌对抗β-内酰胺类抗生素的方式 | 第22-24页 |
| 1.3.3 β-内酰胺酶及其分类 | 第24-26页 |
| 1.3.4 AmpC β-内酰胺酶的表达调控 | 第26-28页 |
| 1.4 细菌生物发光技术与其实际应用 | 第28-29页 |
| 1.5 本研究的主要内容 | 第29-30页 |
| 第二章 建立基于Lux系统的AmpC β-内酰胺酶表达水平检测方法 | 第30-41页 |
| 2.1 材料 | 第30-32页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第30-31页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第32页 |
| 2.1.4 培养基配制 | 第32页 |
| 2.2 方法 | 第32-38页 |
| 2.2.1 Y.enterocolitica DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.2 PCR扩增ampC启动子区域 | 第33-34页 |
| 2.2.3 PCR产物凝胶电泳 | 第34页 |
| 2.2.4 ampC启动子区域PCR产物纯化回收 | 第34-35页 |
| 2.2.5 pBBRLux质粒提取 | 第35页 |
| 2.2.6 DNA双酶切 | 第35-36页 |
| 2.2.7 酶切产物凝胶回收 | 第36页 |
| 2.2.8 重组质粒pLUXampC的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.9 pLUXampC连接产物转化感受态细胞 | 第37页 |
| 2.2.10 克隆子pLUXampC的PCR鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3 结果 | 第38-39页 |
| 2.3.1 成功构建ampC启动子活性检测质粒pLUXampC | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 亚胺培南、头孢西丁对Y.enterocolitica AmpC β-内酰胺酶的诱导作用研究 | 第41-50页 |
| 3.1 材料 | 第41-43页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第41-42页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第42-43页 |
| 3.2 方法 | 第43-46页 |
| 3.2.1 野生株Y.enterocolitica 105.5R(r) MIC值测定 | 第43-44页 |
| 3.2.2 Y.enterocolitica 105.5R(r) ampC启动子活性检测 | 第44-46页 |
| 3.2.3 IMP、FOX对Y.enterocolitica AmpC酶的诱导效果检测 | 第46页 |
| 3.3 结果 | 第46-48页 |
| 3.3.1 Y.enterocolitica 105.5R(r)药物敏感性实验结果 | 第46-47页 |
| 3.3.2 头孢西丁对Y.enterocolitica AmpC β-内酰胺酶有更好的诱导作用 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 小肠结肠炎耶尔森菌AmpD功能研究 | 第50-77页 |
| 4.1 材料 | 第50-53页 |
| 4.1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第50-51页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第51-52页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第52-53页 |
| 4.2 方法 | 第53-63页 |
| 4.2.1 构建Y. enterocolitica ampD1、ampD2和ampD3缺失株 | 第53-58页 |
| 4.2.2 构建Y. enterocolitica ampD1、ampD2和ampD3回补株 | 第58-60页 |
| 4.2.3 各缺失株ampC启动子活性检测 | 第60-61页 |
| 4.2.4 AmpD同系物缺失株β-内酰胺酶活性的测定 | 第61-63页 |
| 4.2.5 MIC值测定 | 第63页 |
| 4.3 结果 | 第63-75页 |
| 4.3.1 Y.enterocolitica具有三个AmpD同系物 | 第63-67页 |
| 4.3.2 成功构建多种AmpD同系物相关缺失株 | 第67-70页 |
| 4.3.3 三种AmpD同系物在Y.enterocolitica ampC基因的调控作用 | 第70-71页 |
| 4.3.4 三种AmpD同系物对Y.enterocolitica β-内酰胺酶活性的影响 | 第71-72页 |
| 4.3.6 基因回补实验 | 第72-74页 |
| 4.3.7 各AmpD同系物缺失株MIC值的测定 | 第74-75页 |
| 4.4 讨论 | 第75-77页 |
| 第五章 青霉素结合蛋白与AmpC β-内酰胺酶的调控 | 第77-98页 |
| 5.1 材料 | 第78-80页 |
| 5.1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第78-79页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第79页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第79-80页 |
| 5.2 方法 | 第80-83页 |
| 5.2.1 构建Y.enterocolitica pbp4、pbp5a、pbp5b和pbp7缺失株 | 第80-83页 |
| 5.2.2 各LMM PBPs缺失株ampC启动子活性检测 | 第83页 |
| 5.2.3 各LMM PBPs缺失株β-内酰胺酶活性的测定 | 第83页 |
| 5.2.4 MIC值测定 | 第83页 |
| 5.3 结果 | 第83-95页 |
| 5.3.1 BLAST定位四种Y.enterocolitica LMM PBPs | 第83-85页 |
| 5.3.2 成功构建Y.enterocolitica LMM PBPs缺失株 | 第85-95页 |
| 5.3.2.3 四种LMM PBPs对Y.enterocolitica ampC基因的调控作用 | 第91-92页 |
| 5.3.2.4 四种LMM PBPs对Y.enterocolitica β-内酰胺酶活性的影响 | 第92页 |
| 5.3.2.5 各LMM PBPs缺失株MIC值的测定 | 第92-95页 |
| 5.4 讨论 | 第95-98页 |
| 第六章 小肠结肠炎耶尔森菌NagZ和AmpR的功能研究 | 第98-111页 |
| 6.1 材料 | 第98-101页 |
| 6.1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第98-99页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第99-100页 |
| 6.1.3 主要仪器设备 | 第100-101页 |
| 6.2 方法 | 第101-104页 |
| 6.2.1 构建Y.enterocolitica nogZ和ampR缺失株 | 第101-103页 |
| 6.2.2 测定细菌β-N-乙酰葡萄糖胺酶活性 | 第103页 |
| 6.2.3 测定细菌β-内酰胺酶活性 | 第103-104页 |
| 6.2.4 MIC值的测定 | 第104页 |
| 6.3 结果 | 第104-109页 |
| 6.3.1 成功构建Y.enterocolitica nagZ和ampR缺失株 | 第104-107页 |
| 6.3.3 NagZ和AmpR缺失对ampC过表达菌株β-内酰胺酶活性的影响 | 第107页 |
| 6.3.4 NagZ缺失对于ampC过表达菌株MIC值的影响 | 第107-108页 |
| 6.3.5 NagZ是Y.enterocolitica中唯一的β-N-乙酰葡萄糖胺酶 | 第108-109页 |
| 6.4 讨论 | 第109-111页 |
| 第七章 论文总结 | 第111-114页 |
| 7.1 本研究主要论点总结 | 第111-112页 |
| 7.2 本研究的创新之处 | 第112-113页 |
| 7.3 不足及展望 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 论文发表情况 | 第122页 |
