| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-22页 |
| 1.1 ALA及其应用 | 第8-10页 |
| 1.1.1 ALA概况 | 第8页 |
| 1.1.2 ALA的应用 | 第8-10页 |
| 1.2 ALA的生物合成 | 第10-14页 |
| 1.2.1 ALA的生物合成途径 | 第10-11页 |
| 1.2.2 微生物发酵法生产ALA的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2.3 高浓度ALA对生物细胞的影响 | 第12-14页 |
| 1.3 膜转运蛋白的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.3.1 转运蛋白的简介 | 第14-15页 |
| 1.3.2 大肠杆菌中氨基酸膜转运蛋白的分类 | 第15-16页 |
| 1.3.3 氨基酸膜转运蛋白的应用 | 第16页 |
| 1.3.4 膜转运蛋白在ALA合成的应用 | 第16-17页 |
| 1.4 转录组学在代谢工程领域的研究进展 | 第17-20页 |
| 1.4.1 转录组学及其技术原理 | 第17-18页 |
| 1.4.2 转录组学在代谢工程领域的应用 | 第18-19页 |
| 1.4.3 转录组学在膜转运蛋白研究领域的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.5 立题背景和意义 | 第20-21页 |
| 1.6 本课题拟研究内容 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-30页 |
| 2.1.1 仪器与设备 | 第22页 |
| 2.1.2 菌种及质粒 | 第22-24页 |
| 2.1.3 引物 | 第24-26页 |
| 2.1.4 试剂及工具酶 | 第26-28页 |
| 2.1.5 溶液 | 第28-29页 |
| 2.1.6 培养基 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-46页 |
| 2.2.1 常用分子生物学实验方法 | 第30-38页 |
| 2.2.2 PCR定点突变 | 第38-39页 |
| 2.2.3 过表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.2.4 基因敲除方法 | 第40-41页 |
| 2.2.5 BCA蛋白定量 | 第41-42页 |
| 2.2.6 SDS-PAGE | 第42页 |
| 2.2.7 ALA工程菌株的发酵 | 第42-43页 |
| 2.2.8 检测方法 | 第43-46页 |
| 3 结果与讨论 | 第46-76页 |
| 3.1 菌株的设计及构建 | 第46-52页 |
| 3.1.1 对照菌株的设计 | 第46-49页 |
| 3.1.2 对照菌株的构建 | 第49-52页 |
| 3.1.3 高产菌株和对照菌株的摇瓶发酵验证 | 第52页 |
| 3.1.4 小结 | 第52页 |
| 3.2 发酵过程控制及转录组取样 | 第52-57页 |
| 3.2.1 发酵过程控制 | 第53-54页 |
| 3.2.2 胞内ALA测定方法的建立 | 第54-56页 |
| 3.2.3 转录组取样点的选择及取样 | 第56页 |
| 3.2.4 小结 | 第56-57页 |
| 3.3 转录组数据分析及ALA转运蛋白预测 | 第57-66页 |
| 3.3.1 RNA提取及质量检测 | 第57-58页 |
| 3.3.2 转录组数据统计分析 | 第58-60页 |
| 3.3.3 膜转运蛋白预测 | 第60-63页 |
| 3.3.4 ALA膜转运蛋白分析 | 第63-66页 |
| 3.3.5 基因rhtA及eamA的转录数据分析 | 第66页 |
| 3.3.6 小结 | 第66页 |
| 3.4 潜在ALA向外转运蛋白的功能验证 | 第66-71页 |
| 3.4.1 潜在ALA向外转运蛋白缺陷菌株的构建 | 第66-67页 |
| 3.4.2 潜在ALA向外转运蛋白过表达菌株的构建 | 第67-69页 |
| 3.4.3 潜在ALA向外转运蛋白缺失及过表达对胞内和胞外ALA的影响 | 第69-70页 |
| 3.4.4 小结 | 第70-71页 |
| 3.5 潜在ALA向内转运蛋白功能验证 | 第71-76页 |
| 3.5.1 潜在ALA向内转运蛋白敲除菌株构建 | 第71页 |
| 3.5.2 潜在ALA向内转运蛋白过表达菌株的构建 | 第71-72页 |
| 3.5.3 潜在ALA向内转运蛋白缺失及过表达对胞内和胞外ALA的影响 | 第72-74页 |
| 3.5.4 小结 | 第74-76页 |
| 4 结论 | 第76-77页 |
| 5 展望 | 第77-78页 |
| 6 参考文献 | 第78-86页 |
| 7 论文发表情况 | 第86-87页 |
| 8 致谢 | 第87页 |
