| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 迟缓爱德华氏菌 | 第11-14页 |
| 1.1.1 理化性质 | 第11页 |
| 1.1.2 对动物的危害 | 第11-12页 |
| 1.1.3 致病机制 | 第12-14页 |
| 1.1.4 感染特征 | 第14页 |
| 1.2 T3SS | 第14-16页 |
| 1.2.1 T3SS的注射体结构 | 第14-15页 |
| 1.2.2 T3SS的功能 | 第15-16页 |
| 1.3 T6SS | 第16-18页 |
| 1.3.1 T6SS发现的过程 | 第16-17页 |
| 1.3.2 T6SS的功能 | 第17-18页 |
| 1.4 迟缓爱德华氏菌感染宿主的关键环节 | 第18-20页 |
| 1.4.1 细菌黏附 | 第18页 |
| 1.4.2 细菌内化 | 第18-20页 |
| 1.4.3 细菌胞内复制 | 第20页 |
| 1.5 斑马鱼研究模型 | 第20-22页 |
| 1.5.1 斑马鱼的免疫系统 | 第20-21页 |
| 1.5.2 斑马鱼感染模型 | 第21-22页 |
| 1.6 本课题研究内容及意义 | 第22-23页 |
| 第2章 T3SS和T6SS在细胞模型上的初步功能研究 | 第23-32页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.2.1 实验所用到的菌株和细胞株 | 第23页 |
| 2.2.2 培养基的配制 | 第23-24页 |
| 2.2.3 实验试剂和仪器 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.3.1 生长曲线测定 | 第24页 |
| 2.3.2 细胞复苏 | 第24-25页 |
| 2.3.3 细胞传代 | 第25页 |
| 2.3.4 在上皮细胞模型上的黏附率测定 | 第25-26页 |
| 2.3.5 在上皮细胞模型上的内化率测定 | 第26页 |
| 2.3.6 在上皮细胞模型内的胞内复制率测定 | 第26-27页 |
| 2.3.7 在巨噬细胞模型上的黏附率测定 | 第27页 |
| 2.3.8 在巨噬细胞模型上的的内化率测定 | 第27页 |
| 2.3.9 在巨噬细胞模型上的胞内复制率测定 | 第27-28页 |
| 2.4 实验结果 | 第28-30页 |
| 2.4.1 生长曲线比较 | 第28页 |
| 2.4.2 在上皮细胞模型上的黏附率、内化率和胞内复制能力比较 | 第28-29页 |
| 2.4.3 在巨噬细胞模型上的黏附率、内化率和胞内复制能力比较 | 第29-30页 |
| 2.5 讨论 | 第30-31页 |
| 2.6 本章小结 | 第31-32页 |
| 第3章 T3SS和T6SS在斑马鱼模型上的感染能力评价 | 第32-41页 |
| 3.1 引言 | 第32页 |
| 3.2 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.2.1 实验动物、实验菌株和引物 | 第32页 |
| 3.2.2 培养基、缓冲液和抗生素 | 第32-33页 |
| 3.3 实验方法 | 第33-36页 |
| 3.3.1 斑马鱼的饲养 | 第33页 |
| 3.3.2 斑马鱼体内细菌的鉴定 | 第33页 |
| 3.3.3 斑马鱼的攻毒实验 | 第33-34页 |
| 3.3.4 斑马鱼的定植实验 | 第34页 |
| 3.3.5 斑马鱼组织RNA的抽提 | 第34-35页 |
| 3.3.6 RNA的消化、逆转录 | 第35页 |
| 3.3.7 RT-qPCR | 第35-36页 |
| 3.4 实验结果 | 第36-40页 |
| 3.4.1 斑马鱼体内病菌鉴定 | 第36页 |
| 3.4.2 ΔT3SS、ΔT6SS与EIB202的斑马鱼攻毒实验 | 第36-38页 |
| 3.4.3 ΔT3SS、ΔT6SS与EIB202在斑马鱼体内的定植比较 | 第38-39页 |
| 3.4.4 斑马鱼在肌肉注射ΔT3SS、ΔT6SS和EIB202后的炎症反应比较 | 第39-40页 |
| 3.5 实验讨论 | 第40页 |
| 3.6 本章小结 | 第40-41页 |
| 第4章 效应物单基因缺失株在细胞模型上的功能初步研究 | 第41-60页 |
| 4.1 引言 | 第41页 |
| 4.2 实验材料 | 第41-45页 |
| 4.2.1 缺失株构建所用到的菌种、质粒和引物 | 第41页 |
| 4.2.2 缺失株构建所用到的培养基和试剂 | 第41-43页 |
| 4.2.3 缺失株构建所用到的软件和测序 | 第43页 |
| 4.2.4 细胞实验所用到的菌株、细胞株、试剂、培养基和仪器 | 第43-45页 |
| 4.3 实验方法 | 第45-50页 |
| 4.3.1 缺失株的构建 | 第45-50页 |
| 4.3.2 迟钝爱德华氏菌的特性测定 | 第50页 |
| 4.4 实验结果 | 第50-58页 |
| 4.4.1 缺失株的构建 | 第50-52页 |
| 4.4.2 在上皮细胞模型上的黏附率、内化率和胞内复制率比较 | 第52-55页 |
| 4.4.3 在巨噬细胞模型上的黏附率、内化率和胞内复制率比较 | 第55-58页 |
| 4.5 讨论 | 第58页 |
| 4.6 本章小结 | 第58-60页 |
| 第5章 效应物单基因缺失株在斑马鱼模型上的感染能力评价 | 第60-65页 |
| 5.1 引言 | 第60页 |
| 5.2 实验材料 | 第60页 |
| 5.3 实验方法 | 第60页 |
| 5.4 实验结果 | 第60-64页 |
| 5.4.1 效应物单基因缺失株与野生株EIB202在斑马鱼模型上的毒力比较 | 第60-61页 |
| 5.4.2 ETAE_0888、ETAE_1757对EIB202在斑马鱼体内定植的影响 | 第61-62页 |
| 5.4.3 ETAE_1757对斑马鱼感染EIB202后炎症因子表达水平的影响 | 第62-64页 |
| 5.5 讨论 | 第64页 |
| 5.6 本章小结 | 第64-65页 |
| 第6章 效应物多基因组合缺失株的功能初步研究 | 第65-72页 |
| 6.1 引言 | 第65页 |
| 6.2 实验材料 | 第65-66页 |
| 6.3 实验方法 | 第66页 |
| 6.4 结果分析 | 第66-69页 |
| 6.4.1 多基因组合缺失株的构建 | 第66页 |
| 6.4.2 在上皮细胞模型上的黏附率、内化率和胞内复制率比较 | 第66-68页 |
| 6.4.3 在巨噬细胞模型上的黏附率、内化率和胞内复制率比较 | 第68-69页 |
| 6.4.4 效应物多基因缺失株与野生株EIB202在斑马鱼模型上的毒力比较 | 第69页 |
| 6.5 实验讨论 | 第69-71页 |
| 6.6 本章小结 | 第71-72页 |
| 第7章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 7.1 结论 | 第72-73页 |
| 7.2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 论文发表 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
