| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 中文文摘 | 第4-9页 |
| 绪论 | 第9-17页 |
| 一、乳腺癌的介绍 | 第9-10页 |
| 二、DAPK及其与包括癌症等疾病的联系 | 第10-12页 |
| 三、DAPK与乳腺癌的联系 | 第12-13页 |
| 四、Tet-on调控系统 | 第13-14页 |
| 五、研究目的和意义 | 第14-17页 |
| 第一章 材料与方法 | 第17-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第17-20页 |
| 1.1.1 实验仪器与耗材 | 第17页 |
| 1.1.2 菌株、载体、乳腺癌病人样本与细胞 | 第17-18页 |
| 1.1.3 实验试剂 | 第18页 |
| 1.1.4 实验试剂配制 | 第18-20页 |
| 1.1.5 引物 | 第20页 |
| 1.2 实验方法 | 第20-37页 |
| 1.2.1 免疫组化 | 第20-22页 |
| 1.2.2 分子克隆过程 | 第22-27页 |
| 1.2.3 细胞培养 | 第27-28页 |
| 1.2.4 瞬时转染检测DAPK shRNA的干扰效果 | 第28-33页 |
| 1.2.5 DAPK shRNA稳定细胞系的构建 | 第33-34页 |
| 1.2.6 乳腺癌细胞功能性实验 | 第34-37页 |
| 第二章 结果 | 第37-55页 |
| 2.1 乳腺浸润性导管癌病人样本DAPK表达的检测及其分析 | 第37-40页 |
| 2.1.1 乳腺浸润性导管癌病人样本DAPK表达的检测 | 第37页 |
| 2.1.2 DAPK与其它病理指标的相关性分析 | 第37-40页 |
| 2.2 DAPK shRNA慢病毒载体和DAPK过表达载体的构建 | 第40-44页 |
| 2.2.1 DAPK shRNA慢病毒载体构建 | 第40-43页 |
| 2.2.2 DAPK过表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 2.3 DAPK shRNA干扰效果的检测 | 第44-45页 |
| 2.4 MCF10A、MCF7和MDA-MB-231细胞系DAPK表达 | 第45-46页 |
| 2.5 puromycin筛选浓度的确定 | 第46-47页 |
| 2.6 MCF7和MDA-MB-231 DAPK shRNA3及scramble shRNA稳定细胞系的建立 | 第47页 |
| 2.7 Dox诱导浓度的确定 | 第47-48页 |
| 2.8 Dox诱导时间的确定 | 第48-49页 |
| 2.9 稳定细胞系功能性实验 | 第49-55页 |
| 2.9.1 敲落DAPK后对MCF7和MDA-MB-231细胞增殖的影响 | 第50-51页 |
| 2.9.2 敲落DAPK后对MCF7和MDA-MB-231细胞迁移的影响 | 第51-53页 |
| 2.9.3 敲落DAPK后对MCF7和MDA-MB-231克隆形成能力的影响 | 第53-55页 |
| 第三章 分析与讨论 | 第55-61页 |
| 3.1 乳腺癌样本的检测及其分析 | 第55-56页 |
| 3.2 DAPK shRNA慢病毒载体质粒及DAPK过表达质粒的构建 | 第56-58页 |
| 3.3 稳定可诱导表达细胞系DAPK shRNA表达的最佳条件确定 | 第58页 |
| 3.4 乳腺癌稳定细胞系功能性实验 | 第58-59页 |
| 3.5 DAPK与乳腺癌组织学分级的联系 | 第59-61页 |
| 第四章 实验结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 个人简历 | 第73-75页 |
