| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 国内外研究现状及本研究目的意义 | 第11-23页 |
| 1.1 伪狂犬病 | 第11-13页 |
| 1.1.1 伪狂犬病与其危害 | 第11页 |
| 1.1.2 PR的致病机制与病理学特征 | 第11-12页 |
| 1.1.3 伪狂犬病的流行病学特征 | 第12页 |
| 1.1.4 PR的防控 | 第12-13页 |
| 1.2 PR病毒的分子生物学 | 第13-19页 |
| 1.2.1 PR病毒粒子及基因组 | 第13-16页 |
| 1.2.2 PRV的毒力基因 | 第16-17页 |
| 1.2.3 PRV参与侵入的主要糖蛋白 | 第17-18页 |
| 1.2.4 PRV的转录与复制 | 第18-19页 |
| 1.3 PR的诊断方法 | 第19-20页 |
| 1.3.1 PR的临床症状诊断 | 第19页 |
| 1.3.2 PRV的实验室抗原诊断 | 第19页 |
| 1.3.3 PRV的抗体血清学诊断 | 第19-20页 |
| 1.4 PR的疫苗 | 第20-22页 |
| 1.4.1 PR病毒的弱毒活疫苗 | 第20-21页 |
| 1.4.2 PRV灭活疫苗 | 第21页 |
| 1.4.3 PR的基因工程疫苗 | 第21-22页 |
| 1.4.4 PRV DNA疫苗 | 第22页 |
| 1.5 研究意义 | 第22-23页 |
| 2 实验材料与方法 | 第23-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 主要实验仪器及耗材 | 第23-24页 |
| 2.1.2 载体、病毒毒株及菌株 | 第24页 |
| 2.1.3 主要商品化试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 常用试剂配制 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-34页 |
| 2.2.1 PRV病毒基因组的提取 | 第26页 |
| 2.2.2 gE基因的克隆 | 第26-28页 |
| 2.2.3 酶切和连接 | 第28-29页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态的制备 | 第29页 |
| 2.2.5 连接产物的转化 | 第29-30页 |
| 2.2.6 质粒的小量提取 | 第30-31页 |
| 2.2.7 重组质粒的酶切检测及测序鉴定 | 第31页 |
| 2.2.8 gE蛋白的诱导表达 | 第31页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE分析及纯化 | 第31-33页 |
| 2.2.10 表达蛋白的Western blot鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3 ELISA诊断方法 | 第34-37页 |
| 2.3.1 间接gE-ELISA诊断方法的建立 | 第34页 |
| 2.3.2 IDXXX商品化PRV gE-ELISA抗体检测方法 | 第34-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-48页 |
| 3.1 gE基因的PCR扩增 | 第37页 |
| 3.2 gE基因原核表达载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.3 gE蛋白的诱导表达 | 第39-40页 |
| 3.4 gE蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| 3.5 重组gE蛋白Western blot检测 | 第41页 |
| 3.6 间接gE-ELISA的初步建立 | 第41-48页 |
| 3.6.1 重组蛋白抗原的包被浓度和阴阳性血清稀释度的优化确定 | 第41-42页 |
| 3.6.2 底物显色的优化确定 | 第42-43页 |
| 3.6.3 阴阳性临界值的确定 | 第43页 |
| 3.6.4 本试验与IDXXX试剂盒的符合率 | 第43-45页 |
| 3.6.5 批肉、批间重复试验 | 第45-46页 |
| 3.6.6 交叉试验 | 第46-48页 |
| 4 结论与讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 结论 | 第48页 |
| 4.2 讨论 | 第48-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
