| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 第一篇 文献综述 | 第17-45页 |
| 第一章 副溶血弧菌主要毒力因子及其致病机理 | 第17-31页 |
| 1 副溶血弧菌的致病力及流行 | 第17-18页 |
| 2 副溶血弧菌的主要毒力因子 | 第18-23页 |
| ·溶血素 | 第18-19页 |
| ·Ⅲ型分泌系统 | 第19-21页 |
| ·Ⅵ型分泌系统 | 第21页 |
| ·黏附相关因子 | 第21-23页 |
| 参考文献 | 第23-31页 |
| 第二章 细菌Ⅵ型分泌系统研究进展 | 第31-45页 |
| 1 革兰阴性菌分泌系统概述 | 第31-32页 |
| 2 Ⅵ型分泌系统的研究进展 | 第32-38页 |
| ·T6SS的结构和作用模式 | 第32-35页 |
| ·T6SS的组分和功能 | 第35-36页 |
| ·T6SS的效应因子 | 第36-37页 |
| ·T6SS的功能研究进展 | 第37-38页 |
| 3 副溶血弧菌的T6SS的研究进展 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-45页 |
| 第二篇 试验研究 | 第45-153页 |
| 第三章 副溶血弧菌主要毒力相关因子的分布 | 第45-61页 |
| 1 材料与方法 | 第46-50页 |
| ·菌株及培养条件 | 第46页 |
| ·试剂与仪器 | 第46-47页 |
| ·细菌DNA的制备 | 第47页 |
| ·引物设计 | 第47-50页 |
| ·副溶血弧菌毒力相关的主要基因的分布 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-56页 |
| ·溶血素基因的分布 | 第50-51页 |
| ·黏附相关因子基因的分布 | 第51页 |
| ·T3SS-1和T3SS-2主要基因的分布 | 第51-52页 |
| ·T6SS-1和T6SS-2主要基因的分布 | 第52-56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 第四章 副溶血弧菌T6SS-1中vipA1、hcp1和dotU1基因缺失株的构建 | 第61-85页 |
| 1 材料与方法 | 第62-72页 |
| ·菌株及培养条件 | 第62-63页 |
| ·试剂与仪器 | 第63页 |
| ·引物设计 | 第63-64页 |
| ·vipA1基因缺失株的构建 | 第64-66页 |
| ·hcp1基因缺失株的构建 | 第66-67页 |
| ·dotU1基因缺失株的构建 | 第67页 |
| ·v-pA1基因互补株的构建 | 第67-68页 |
| ·hcp1基因互补株的构建 | 第68页 |
| ·dotU1基因互补株的构建 | 第68页 |
| ·荧光定量PCR检测基因转录水平 | 第68-70页 |
| ·VipA1、Hcp1、Hop2及DotU1蛋白的原核表达 | 第70-71页 |
| ·重组蛋白免疫血清的制备 | 第71-72页 |
| ·目的蛋白在缺失株中的表达情况分析 | 第72页 |
| ·遗传稳定性分析 | 第72页 |
| 2 结果 | 第72-80页 |
| ·vipA1基因缺失株的构建和鉴定 | 第72-74页 |
| ·hcp1基因缺失株的构建和鉴定 | 第74-75页 |
| ·dotU1基因缺失株的构建和鉴定 | 第75-76页 |
| ·互补株的构建和鉴定 | 第76-77页 |
| ·遗传稳定性分析 | 第77-78页 |
| ·荧光定量PCR检测 | 第78页 |
| ·Hcp1、Hcp2、VipA1和DotU1蛋白的原核表达和血清制备 | 第78-79页 |
| ·缺失株的T6SS-1和T6SS-2分泌功能分析 | 第79-80页 |
| 3 讨论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-85页 |
| 第五章 副溶血弧菌T6SS-1中vipA1、hcp1和dotU1基因缺失株特性分析 | 第85-103页 |
| 1 材料与方法 | 第86-89页 |
| ·菌株 | 第86页 |
| ·试剂与仪器 | 第86-87页 |
| ·生长曲线的测定 | 第87页 |
| ·细菌运动性检测 | 第87页 |
| ·pH值影响试验 | 第87页 |
| ·抗盐实验 | 第87页 |
| ·不同菌株生物被膜形成能力分析 | 第87-88页 |
| ·细胞黏附试验 | 第88页 |
| ·细胞毒性试验 | 第88页 |
| ·细胞凋亡试验 | 第88-89页 |
| ·细胞因子的检测 | 第89页 |
| ·药物敏感试验检测 | 第89页 |
| 2 结果 | 第89-99页 |
| ·生长曲线的测定 | 第89-90页 |
| ·细菌运动性试验 | 第90-91页 |
| ·pH影响试验 | 第91-92页 |
| ·抗盐试验 | 第92-93页 |
| ·生物被膜的形成能力分析 | 第93-94页 |
| ·细胞黏附试验 | 第94-95页 |
| ·细胞毒性试验 | 第95-96页 |
| ·细胞凋亡试验 | 第96-98页 |
| ·细胞因子的检测 | 第98-99页 |
| ·药物敏感试验检测 | 第99页 |
| 3 讨论 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-103页 |
| 第六章 副溶血弧菌vipA-hcp1双基因缺失株的构建及特性分析 | 第103-121页 |
| 1 材料与方法 | 第104-106页 |
| ·菌株及培养条件 | 第104页 |
| ·vipA1-hcp1双基因缺失株和互补株的构建 | 第104页 |
| ·荧光定量PCR检测基因转录水平 | 第104-105页 |
| ·VipA1和Hcp1蛋白在菌株中的表达情况的分析 | 第105页 |
| ·遗传稳定性分析 | 第105页 |
| ·生长曲线和细菌运动性的测定 | 第105页 |
| ·pH值影响试验 | 第105页 |
| ·菌株生物被膜形成能力分析 | 第105页 |
| ·细胞黏附试验 | 第105-106页 |
| ·细胞毒性试验 | 第106页 |
| ·细胞凋亡试验 | 第106页 |
| ·细胞因子的检测 | 第106页 |
| ·药物敏感性试验 | 第106页 |
| 2 结果 | 第106-115页 |
| ·vipA1-hcp1双基因缺失株的构建和鉴定 | 第106-107页 |
| ·细菌生长曲线的测定和运动性试验 | 第107-108页 |
| ·pH值影响试验 | 第108-109页 |
| ·抗盐试验 | 第109-110页 |
| ·生物被膜的形成能力分析 | 第110-111页 |
| ·细胞黏附试验 | 第111页 |
| ·细胞毒性试验 | 第111-113页 |
| ·细胞凋亡试验 | 第113-114页 |
| ·细胞因子的检测 | 第114-115页 |
| ·药物敏感试验 | 第115页 |
| 3 讨论 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-121页 |
| 第七章 副溶血弧菌烯醇化酶序列分析、克隆表达及抗体制备 | 第121-135页 |
| 1 材料与方法 | 第122-126页 |
| ·菌株及培养条件 | 第122页 |
| ·试剂与仪器 | 第122页 |
| ·实验动物 | 第122页 |
| ·引物设计 | 第122-123页 |
| ·细菌DNA的制备 | 第123页 |
| ·eno基因在副溶血弧菌中的分布 | 第123页 |
| ·序列分析 | 第123页 |
| ·烯醇化酶基因的克隆表达 | 第123-124页 |
| ·免疫血清的制备和效价测定 | 第124-125页 |
| ·Western blot | 第125页 |
| ·不同副溶血弧菌中烯醇化酶的表达情况分析 | 第125页 |
| ·重组蛋白酶活测定 | 第125-126页 |
| 2 结果 | 第126-128页 |
| ·eno基因PCR扩增 | 第126页 |
| ·序列分析 | 第126页 |
| ·融合蛋白的表达及纯化 | 第126-127页 |
| ·重组蛋白免疫血清的制备 | 第127页 |
| ·不同菌株烯醇化酶的表达情况 | 第127-128页 |
| ·重组蛋白的酶活测定 | 第128页 |
| 3 讨论 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-135页 |
| 第八章 副溶血弧菌烯醇化酶生物学功能和免疫保护性的研究 | 第135-153页 |
| 1 材料与方法 | 第136-139页 |
| ·菌株及培养条件 | 第136页 |
| ·试剂与仪器 | 第136页 |
| ·烯醇化酶在副溶血弧菌上的定位 | 第136-138页 |
| ·纤溶酶原结合试验 | 第138页 |
| ·黏附和黏附抑制试验 | 第138-139页 |
| ·动物试验 | 第139页 |
| 2 结果 | 第139-147页 |
| ·烯醇化酶在副溶血弧菌上的定位 | 第139-144页 |
| ·纤溶酶原结合试验 | 第144-145页 |
| ·黏附和黏附抑制试验 | 第145-146页 |
| ·重组蛋白VP-enolase小鼠保护试验的效果评价 | 第146-147页 |
| 3 讨论 | 第147-149页 |
| 参考文献 | 第149-153页 |
| 全文总结 | 第153-155页 |
| 博士期间已发表文章 | 第155-157页 |
| 致谢 | 第157页 |
