| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 英文缩写词表 | 第12-14页 |
| 第一篇 文献综述 | 第14-32页 |
| 第一章 坦布苏病毒的研究进展 | 第14-32页 |
| 1 坦布苏病毒病的概述 | 第14页 |
| 2 病原学 | 第14-15页 |
| ·病毒的结构 | 第14-15页 |
| ·病毒的生物学特性 | 第15页 |
| 3 流行情况 | 第15页 |
| 4 坦布苏病毒病的诊断 | 第15-20页 |
| ·临床诊断 | 第15-16页 |
| ·病原检测 | 第16-20页 |
| ·血清学检测抗体 | 第20页 |
| 5 国内疫苗的研究进展 | 第20-22页 |
| ·灭活疫苗 | 第20-21页 |
| ·弱毒疫苗 | 第21页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第21页 |
| ·基因工程活载体疫苗 | 第21页 |
| ·核酸疫苗 | 第21-22页 |
| ·合成肽疫苗 | 第22页 |
| 6 实验动物感染模型 | 第22页 |
| 7 防控措施 | 第22-24页 |
| 8 坦布苏病毒的NS1蛋白 | 第24-26页 |
| ·NS1蛋白 | 第24页 |
| ·NS1蛋白的研究进展 | 第24页 |
| ·展望 | 第24-26页 |
| 参考文献 | 第26-32页 |
| 第二篇 试验部分 | 第32-82页 |
| 第一章 抗鹅坦布苏病毒JS804株NS1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第32-54页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| ·病毒 | 第33页 |
| ·试验动物 | 第33页 |
| ·试验试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器设备 | 第33-34页 |
| 2 方法 | 第34-41页 |
| ·免疫抗原的制备 | 第34页 |
| ·筛选用抗原NS1的大量制备和纯化 | 第34-35页 |
| ·免疫动物 | 第35页 |
| ·单克隆抗体检测方法 | 第35-37页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第37-38页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化 | 第38页 |
| ·大量制备单克隆抗体 | 第38-39页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第39-41页 |
| 3 结果 | 第41-49页 |
| ·免疫抗原的制备和效价的测定 | 第41-42页 |
| ·筛选抗原(NS1)的制备与纯化 | 第42页 |
| ·ELISA检测方法的建立 | 第42-46页 |
| ·建立杂交瘤细胞株 | 第46页 |
| ·纯化单抗腹水 | 第46-47页 |
| ·单抗的鉴定 | 第47-48页 |
| ·纯化的单抗ELISA效价测定 | 第47页 |
| ·单抗特异性的鉴定 | 第47-48页 |
| ·间接免疫荧光(IFA) | 第48-49页 |
| ·单抗的体外中和试验 | 第49页 |
| ·体内中和试验 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·免疫原的制备 | 第49-50页 |
| ·细胞融合 | 第50-51页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第51页 |
| ·亚克隆 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 第二章 检测鹅坦布苏病毒双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第54-74页 |
| 1 材料 | 第55页 |
| 2 方法 | 第55-60页 |
| ·兔抗鹅坦布苏病毒多抗的制备 | 第55-56页 |
| ·单抗的制备 | 第56页 |
| ·单抗腹水的纯化 | 第56-57页 |
| ·双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第57-59页 |
| ·样品阴阳性判定标准的确定 | 第59页 |
| ·敏感性实验 | 第59-60页 |
| ·特异性实验 | 第60页 |
| ·重复性试验 | 第60页 |
| ·符合率试验 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-69页 |
| ·兔抗鹅坦布苏病毒多抗血清的制备 | 第60-61页 |
| ·兔抗鹅坦布苏病毒多抗血清的纯化和蛋白含量的测定 | 第61页 |
| ·单抗腹水的纯化 | 第61-62页 |
| ·捕获抗体(兔多抗)和检测抗体(4A9)最佳稀释度的确定 | 第62页 |
| ·封闭时间的确定 | 第62-63页 |
| ·封闭液的选择 | 第63页 |
| ·抗原反应时间的确定 | 第63页 |
| ·单抗作用时间的确定 | 第63-64页 |
| ·酶标羊抗鼠二抗作用时间的确定 | 第64页 |
| ·酶标羊抗鼠二抗最佳稀释度的确定 | 第64-65页 |
| ·底物显色时间的确定 | 第65页 |
| ·阴阳性判定标准的确定 | 第65-66页 |
| ·敏感性试验 | 第66-67页 |
| ·特异性试验 | 第67页 |
| ·重复性试验 | 第67-68页 |
| ·符合率试验 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-74页 |
| 第三章 双抗体夹心ELISA与套式RT-PCR检测鸭坦布苏病毒的比较 | 第74-82页 |
| 1 材料 | 第75页 |
| ·病毒 | 第75页 |
| ·实验动物 | 第75页 |
| ·试剂和耗材 | 第75页 |
| 2 方法 | 第75-76页 |
| ·鹅坦布苏病毒的大量制备 | 第75页 |
| ·动物试验 | 第75-76页 |
| 3 检测试验 | 第76-77页 |
| ·双夹心ELISA方法检测 | 第76页 |
| ·套式RT-PCR方法检测 | 第76-77页 |
| ·套式RT-PCR方法的建立 | 第76-77页 |
| 4 实验结果 | 第77-78页 |
| ·病毒感染不同天数检测结果的比较 | 第77-78页 |
| ·两种方法检测结果的符合率 | 第78页 |
| 5 讨论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-82页 |
| 全文总结 | 第82-84页 |
| 附录：常用试剂的配制 | 第84-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
