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环果寡糖糖基转移酶基因的异源表达及催化机理研究

摘要第1-5页
abstract第5-6页
英文缩写汇总表第6-10页
第一章 文献综述第10-24页
   ·菊糖第10-11页
     ·菊糖的简介第10页
     ·菊糖的功能与应用第10-11页
   ·菊粉酶第11-15页
     ·菊粉酶简介第11-12页
     ·菊粉酶来源第12页
     ·菊粉酶特性第12-13页
     ·菊粉酶分子生物学特性第13-15页
   ·环果寡糖糖基转移酶第15-20页
     ·环果寡糖糖基转移酶简介第15-16页
     ·环果寡糖糖基转移酶性质第16-17页
     ·环果寡糖糖基转移酶异源表达第17-20页
   ·环果寡糖第20-23页
     ·环果寡糖简介第20页
     ·环果寡糖的结构第20-22页
     ·环果寡糖的研究现状及应用前景第22-23页
   ·本课题研究意义第23-24页
第二章 材料与方法第24-39页
   ·菌株与质粒第24页
   ·培养基第24页
   ·试剂第24-26页
     ·主要实验试剂第24-25页
     ·配置试剂第25-26页
       ·缓冲液第25页
       ·SDS-PAGE电泳所需试剂第25-26页
   ·引物第26-27页
   ·实验方法第27-39页
     ·类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)Lfos16的培养第27页
     ·类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)Lfos16基因组的提取第27-28页
     ·DNA的 1%琼脂糖凝胶电泳第28页
     ·环果寡糖糖基转移酶基因PCR扩增第28-33页
       ·环果寡糖糖基转移酶基因特异引物扩增第28-29页
       ·%DNA琼脂糖凝胶切胶纯化回收第29页
       ·环果寡糖糖基转移酶PCR产物的亚克隆第29-30页
       ·环果寡糖糖基转移酶基因两翼序列的TAIL PCR扩增第30-32页
       ·环果寡糖糖基转移酶基因两翼序列的SEFA PCR扩增第32-33页
     ·环果寡糖糖基转移酶CFT-pET28a(+)载体构建第33-36页
     ·pCFT150(BL 21) 重组菌的诱导表达及活性测定第36-37页
       ·pCFT150(BL 21) 重组菌的诱导表达及产物的SDS-PAGE分析第36页
       ·pCFT150重组菌的活性测定第36-37页
       ·pCFT150重组蛋白与野生菌蛋白酶活性比较第37页
     ·CFTase基因截短表达及各部分基因功能测定第37-39页
       ·CFTase基因截短表达第37-38页
       ·CFTase部分基因功能测定第38-39页
第三章 结果与讨论第39-58页
   ·Lfos16基因组提取第39-40页
   ·环果寡糖糖基转移酶编码基因PCR的扩增及鉴定第40-44页
     ·环果寡糖糖基转移酶编码基因特异引物扩增结果第40页
     ·环果寡糖糖基转移酶基因两翼序列的TAIL PCR扩增结果及鉴定第40-41页
     ·环果寡糖糖基转移酶基因两翼序列的SEFA PCR扩增结果及鉴定第41-42页
     ·环果寡糖糖基转移酶序列的分析第42-44页
   ·环果寡糖糖基转移酶原核表达载体构建第44-46页
     ·环果寡糖糖基转移酶全长序列扩增及表达载体构建第44-45页
     ·环果寡糖糖基转移酶表达重组质粒鉴定第45-46页
   ·环果寡糖糖基转移酶的诱导表达及活性测定第46-48页
     ·环果寡糖糖基转移酶的诱导表达SDS-PAGE电泳分析第46-47页
     ·环果寡糖糖基转移酶的诱导表达酶作用产物检测第47-48页
     ·环果寡糖糖基转移酶活性测定第48页
   ·环果寡糖糖基转移酶截短表达第48-58页
     ·环果寡糖糖基转移酶截短基因序列扩增第48-50页
     ·环果寡糖糖基转移酶截短序列的诱导表达及SDS-PAGE电泳分析第50-51页
     ·环果寡糖糖基转移酶截短部分基因功能测定第51-56页
       ·环果寡糖糖基转移酶截短序列的诱导表达酶与不同底物作用TLC分析第51-54页
       ·环果寡糖糖基转移酶截短序列的诱导表达酶与不同底物作用HPLC分析第54-56页
     ·CFTase部分基因功能预测第56-58页
第四章 结论第58-59页
参考文献第59-62页
致谢第62页

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