| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一部分 碱性核酸酶AN毕赤酵母表达载体的构建 | 第15-30页 |
| 1 实验材料 | 第15-17页 |
| ·菌株和质粒 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15-16页 |
| ·主要试剂、溶液配制 | 第16-17页 |
| 2 实验方法 | 第17-23页 |
| ·DH5α 感受态细胞的制备[16] | 第18页 |
| ·新设计合成的ul12-2 序列的获得 | 第18-19页 |
| ·引物设计及测序比对 | 第18-19页 |
| ·目的基因ul12-2 的设计与合成 | 第19页 |
| ·重组质粒pPIC9K- UL12-2 的构建 | 第19-23页 |
| ·目的序列ul12-2 的PCR产物双酶切 | 第19-20页 |
| ·pPIC9K质粒的双酶切反应 | 第20页 |
| ·酶切产物的连接反应 | 第20-21页 |
| ·将连接产物pPIC9K -UL12-2 转化DH5α[16] | 第21页 |
| ·阳性重组子的筛选鉴定 | 第21-23页 |
| 3 实验结果 | 第23-27页 |
| ·含 6×His标签ul12-2 的获得 | 第23-26页 |
| ·含 6×His标签重组质粒的构建及鉴定 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-30页 |
| 第二部分 AN的毕赤酵母重组子的筛选及表达 | 第30-45页 |
| 1 实验材料 | 第30-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31页 |
| ·主要溶液及试剂配制 | 第31-34页 |
| 2 实验流程 | 第34-38页 |
| ·制备转化酵母菌GS115的线性质粒pPIC9K-UL12-2 | 第35-36页 |
| ·制备GS115感受态细胞[1] | 第36-37页 |
| ·线性化质粒电转化GS115[1] | 第37页 |
| ·His~＋转化子的筛选 | 第37页 |
| ·阳性转化子pPIC9K-UL12-2/GS115在摇瓶诱导表达 | 第37-38页 |
| ·目的基因ul12-2 表达蛋白AN的检测 | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-41页 |
| ·制备转化酵母菌GS115的线性质粒pPIC9K-UL12-2 | 第38-39页 |
| ·酵母转化菌GS115的PCR鉴定以及表型鉴定 | 第39页 |
| ·蛋白水平的检测 | 第39-40页 |
| ·碱性核酸酶AN的时间诱导表达分析 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-45页 |
| 第三部分 AN的纯化与活性鉴定 | 第45-59页 |
| 1 实验材料 | 第45-48页 |
| ·菌株 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45-46页 |
| ·主要仪器设备 | 第46页 |
| ·主要溶液及试剂配制 | 第46-48页 |
| 2 实验方法 | 第48-52页 |
| ·目的蛋白AN在毕赤酵母中的诱导表达 | 第48页 |
| ·质粒pUC19的提取 | 第48-49页 |
| ·酶切质粒pUC19 | 第49-51页 |
| ·AN的亲和层析纯化 | 第51-52页 |
| ·AN的离子交换层析纯化 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-57页 |
| ·重组AN对线性片段的酶切反应 | 第52-53页 |
| ·重组目的蛋白AN的亲和层析纯化 | 第53-54页 |
| ·强阳离子交换层析（SP柱） | 第54-56页 |
| ·强阴离子交换层析纯化（Q柱） | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 全文总结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 文献综述 植物药物治疗单纯疱疹病毒的研究进展 | 第63-72页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 附录 | 第72-74页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
