| 缩略词表 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1、文献综述 | 第11-16页 |
| ·肿瘤治疗与细胞凋亡 | 第11页 |
| ·凋亡素结构与选择性诱导肿瘤细胞凋亡 | 第11-12页 |
| ·凋亡素的核定位与其特异诱导肿瘤细胞凋亡 | 第12-13页 |
| ·凋亡素相互作用蛋白质 | 第13-14页 |
| ·HSP70与细胞凋亡 | 第14-16页 |
| 2、前言 | 第16-17页 |
| 3、材料与方法 | 第17-43页 |
| ·实验材料 | 第17-22页 |
| ·主要试剂 | 第17-19页 |
| ·主要试剂的配制方法 | 第19-21页 |
| ·仪器设备 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-43页 |
| ·TAT-apoptin纯化 | 第22-23页 |
| ·细胞培养 | 第23页 |
| ·细胞瞬时转染与药物处理 | 第23-24页 |
| ·HSP70siRNA | 第24页 |
| ·AO/EB双染和Hoechst33342染色分析 | 第24-25页 |
| ·Annexin-V-FITC/PI流 式细胞仪检测细胞凋亡 | 第25页 |
| ·WST-1 colorimetric | 第25-26页 |
| ·Pull-down技术分析凋亡素与HSP70 相互作用 | 第26-27页 |
| ·Western Blot | 第27-30页 |
| ·免疫共沉淀Co-IP | 第30-31页 |
| ·免疫荧光分析 | 第31页 |
| ·细胞核蛋白提取实验 | 第31-32页 |
| ·EMSA探针的制备 | 第32页 |
| ·生物素探针的标记 | 第32-33页 |
| ·EMSA实验 | 第33-35页 |
| ·染色质免疫共沉淀 | 第35-38页 |
| ·质粒构建 | 第38-41页 |
| ·荧光报告基因质粒购建 | 第41-42页 |
| ·激光共聚焦检测凋亡素定位 | 第42-43页 |
| 4、结果 | 第43-59页 |
| ·凋亡素特异下调肿瘤细胞的HSP70 | 第43-46页 |
| ·pEGFP-Cl-Apoptin转染HepG2和HL7702细胞后显示特异下调HepG2细胞中HSP70表达 | 第43-44页 |
| ·TAT-Apoptin作用HepG2和HL7702细胞后仅特异下调HepG2细胞中HSP70表达 | 第44-45页 |
| ·不同剂量TAT-Apoptin对HepG2细胞中的HSP70表达影响 | 第45页 |
| ·TAT-凋亡素下调HepG2细胞HSP70表达具有时间依赖性 | 第45-46页 |
| ·凋亡素诱导HepG2细胞凋亡的程度与HSP70表达水平呈负相关 | 第46-49页 |
| ·pCDENA3.1-HSP70和HSP70 siRNA转染HepG2细胞对HSP70表达的影响 | 第46-47页 |
| ·AO / EB荧光染色检测HSP70过表达和HSP70 siRNA对HepG2细胞凋亡的影响 | 第47页 |
| ·Hoest 33342染色检测HSP70过表达和HSP70 siRNA对HepG2细胞凋亡的影响 | 第47页 |
| ·流式细胞术检测HSP70过表达和HSP70 si RNA对HepG2细胞凋亡的影响 | 第47-48页 |
| ·凋亡素与HSP70过表达或Si RNA联合作用对Hep G2细胞增殖的影响 | 第48-49页 |
| ·凋亡素通过促进HSF1三聚体解聚下调HSP70表达 | 第49-51页 |
| ·EMSA实验证实Apoptin与H HSE结合,下调HSP70表达 | 第51-55页 |
| ·竞争性EMSA实验结果 | 第51页 |
| ·凋亡素浓度对凋亡素与HSE结合率的影响 | 第51-52页 |
| ·不同浓度凋亡素作用HepG2细胞后对结合率影响 | 第52页 |
| ·CHIP实验证实凋亡素在体内可与HSP70启动子结合 | 第52-53页 |
| ·双荧光素酶报告基因的表达证实凋亡素在体内能与HSE结合并下调报告基因表达 | 第53-55页 |
| ·Apoptin与HSP70存在相互作用，与HSF1无相互作用 | 第55-56页 |
| ·Apoptin对HSP70表达的下调HSF1细胞定位密切相关 | 第56-58页 |
| ·过表达HSP70影响Apotpin核质分布 | 第58-59页 |
| 5、讨论 | 第59-69页 |
| ·凋亡素通过抑制HSP70的应激性表达特异性诱导肿瘤细胞凋亡 | 第60-62页 |
| ·凋亡素通过调控转录起始抑制HSP70的应激性表达 | 第62-64页 |
| ·凋亡素不通过与HSF1结合抑制HSP70的应激性转录 | 第62页 |
| ·凋亡素通过影响HSF1的三聚体化抑制HSP70的应激性转录 | 第62-63页 |
| ·凋亡素是否通过影响HSF1磷酸化抑制HSP70的转录没有进行研究 | 第63页 |
| ·凋亡素主要通过与HSE结合，竞争性阻止HSF1与HSE的结合抑制HSP70的应激性转录 | 第63-64页 |
| ·凋亡素与HSP70结合影响HSP70在细胞中定位 | 第64-66页 |
| ·凋亡素在肿瘤细胞中定位于细胞核，在正常细胞中定位于细胞质 | 第64页 |
| ·凋亡素在细胞质内与HSP70结合并影响HSP70和HSF1的细胞定位 | 第64-66页 |
| ·对课题的反思与展望 | 第66-69页 |
| ·对课题的反思 | 第66-67页 |
| ·研究结果的应用前景 | 第67页 |
| ·研究结果对鸡贫血病毒致病作用机制研究启示 | 第67-69页 |
| 6、结论 | 第69-70页 |
| 7，致谢 | 第70-71页 |
| 8、参考文献 | 第71-80页 |
| 9、个人简历 | 第80-82页 |
