| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-24页 |
| ·欧美杨细菌性溃疡病研究概况 | 第12-13页 |
| ·杨树溃疡病类抗病性研究进展 | 第13页 |
| ·类黄酮的研究概况 | 第13-15页 |
| ·植物中二氢黄酮醇-4-还原酶(DFR)的相关研究 | 第15-16页 |
| ·植物中无色花色素还原酶(LAR)的相关研究 | 第16-17页 |
| ·儿茶素概述 | 第17-19页 |
| ·转基因方法概况 | 第19-21页 |
| ·农杆菌介导法 | 第19-20页 |
| ·基因枪介导法 | 第20-21页 |
| ·超声波介导法 | 第21页 |
| ·林木转基因进展 | 第21-22页 |
| ·反义基因相关研究进展 | 第22-23页 |
| ·本研究的技术路线、目的及意义 | 第23-24页 |
| 2 杨树中DFR和LAR响应病原菌的差异表达及儿茶素含量的变化 | 第24-38页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·供试病原菌 | 第24页 |
| ·主要仪器和工具 | 第24页 |
| ·细菌培养基 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-28页 |
| ·菌株的活化与培养 | 第25页 |
| ·接种方法 | 第25页 |
| ·取样方法 | 第25页 |
| ·总RNA的提取及检测 | 第25-26页 |
| ·cDNA第一链的反转录合成 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·荧光定量PCR检测基因表达 | 第27-28页 |
| ·HPLC法测量不同品种间儿茶素的含量 | 第28页 |
| ·儿茶素对溃疡病菌的抑制作用 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-36页 |
| ·接种后发病情况的观察 | 第28-29页 |
| ·总RNA检测 | 第29-30页 |
| ·不同品种杨树接种溃疡病菌后DFR基因和LAR基因的差异表达分析 | 第30-33页 |
| ·接种溃疡病菌后不同品种杨树中儿茶素的含量分析 | 第33-35页 |
| ·儿茶素的抑菌分析 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 3 植物反义表达载体的构建、84K杨的转化及转基因植株的检测 | 第38-57页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·菌株和质粒 | 第38页 |
| ·植物材料 | 第38页 |
| ·酶与试剂盒 | 第38页 |
| ·主要仪器设备与工具 | 第38页 |
| ·主要培养基 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-48页 |
| ·杨树树皮总RNA的提取及cDNA第一链的反转录合成 | 第39页 |
| ·DFR基因的扩增 | 第39-40页 |
| ·克隆载体的连接、转化与测序 | 第40-42页 |
| ·植物反义表达载体的构建 | 第42-44页 |
| ·农杆菌工程菌的制备 | 第44-46页 |
| ·根癌农杆菌介导的84K杨和烟草的转化和再生 | 第46页 |
| ·84K杨基因组DNA的提取及普通PCR检测 | 第46-48页 |
| ·84K杨总RNA的提取及反转录合成cDNA | 第48页 |
| ·荧光定量PCR检测84K杨抗性植株 | 第48页 |
| ·HPLC测量84K杨抗性植株中的儿茶素含量 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-55页 |
| ·RNA的检测 | 第48-49页 |
| ·DFR基因的获得 | 第49页 |
| ·DFR阳性克隆鉴定 | 第49-51页 |
| ·反义表达载体anti-pBI121-DFR的鉴定 | 第51页 |
| ·anti-pBI121-DFR转基因工程菌的获得 | 第51-52页 |
| ·抗性84K植株的获得 | 第52页 |
| ·84K抗性植株DNA的检测分析 | 第52-53页 |
| ·84K抗性植株的qRT-PCR分析 | 第53-54页 |
| ·84K抗性植株的儿茶素检测分析 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 4 植物正义表达载体的构建、烟草的转化及转基因植株的检测 | 第57-71页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·菌株和质粒 | 第57页 |
| ·酶与试剂盒 | 第57页 |
| ·主要仪器设备与工具 | 第57页 |
| ·主要培养基 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-62页 |
| ·LAR基因的扩增 | 第57-58页 |
| ·克隆载体的连接、转化与测序 | 第58-59页 |
| ·植物正义表达载体的构建及农杆菌转化 | 第59-60页 |
| ·根癌农杆菌介导烟草的转化和再生 | 第60-61页 |
| ·烟草基因组DNA的提取及普通PCR检测 | 第61页 |
| ·烟草总RNA的提取和反转录cDNA的合成 | 第61页 |
| ·荧光定量PCR检测烟草抗性植株 | 第61-62页 |
| ·HPLC测量烟草抗性植株中的儿茶素含量 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-69页 |
| ·LAR基因的获得 | 第62页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第62-64页 |
| ·正义表达载体pCAMBIA1301-LAR的鉴定 | 第64页 |
| ·pCAMBIA1301-LAR转基因工程菌的获得 | 第64-65页 |
| ·抗性烟草植株的获得 | 第65页 |
| ·烟草抗性植株DNA的检测分析 | 第65-66页 |
| ·烟草抗性植株的qRT-PCR分析 | 第66-67页 |
| ·烟草抗性植株的儿茶素检测分析 | 第67-69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| 5 结论与讨论 | 第71-73页 |
| ·结论 | 第71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 导师简介 | 第81-82页 |
| 副导师简介 | 第82-83页 |
| 个人简介 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
