| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| ·microRNA的简介 | 第15-18页 |
| ·microRNA的发现 | 第15页 |
| ·microRNA的成熟过程 | 第15页 |
| ·microRNA的作用机制 | 第15-16页 |
| ·microRNA的生物学功能 | 第16-17页 |
| ·microRNA的靶基因预测与鉴定 | 第17-18页 |
| ·骨骼肌的生长发育 | 第18-21页 |
| ·骨骼肌发生和发育 | 第18-19页 |
| ·肌肉生成的调控因子 | 第19-20页 |
| ·肌肉相关microRNA的研究进展 | 第20-21页 |
| ·miR-423-5p的研究进展 | 第21页 |
| ·SRF基因的研究进展 | 第21-22页 |
| ·研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 广西巴马小型猪miR-423-5p的时空表达及其靶基因预测 | 第23-32页 |
| ·试验材料 | 第23页 |
| ·试验动物 | 第23页 |
| ·主要试验仪器 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·生物学数据库 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-26页 |
| ·靶标预测 | 第23页 |
| ·定量引物的设计与合成 | 第23-24页 |
| ·总RNA的提取 | 第24页 |
| ·反转录 | 第24-25页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第25-26页 |
| ·数据统计与分析 | 第26页 |
| ·试验结果与分析 | 第26-30页 |
| ·靶标基因预测结果 | 第26-28页 |
| ·总RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·骨骼肌不同时期miRNA-423-5p和SRF基因的表达检测 | 第29页 |
| ·SRF基因与miR-423-5p的表达相关分析 | 第29-30页 |
| ·miR-423-5p不同组织的表达情况 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| ·靶基因预测 | 第30-31页 |
| ·miR-423-5p组织表达情况 | 第31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第三章 miR-423-5p慢病毒表达载体的构建及鉴定 | 第32-41页 |
| ·试验材料 | 第32-33页 |
| ·载体、菌株 | 第32页 |
| ·主要试剂、耗材 | 第32页 |
| ·主要试验仪器 | 第32-33页 |
| ·试验方法 | 第33-36页 |
| ·广西巴马小型猪基因组DNA的提取 | 第33页 |
| ·引物设计与合成 | 第33页 |
| ·pre-miR-423-5p的PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·PCR产物回收与pMD-19T Simple连接 | 第34页 |
| ·重组质粒的转化 | 第34页 |
| ·重组质粒PCR、测序鉴定 | 第34-35页 |
| ·质粒的抽提 | 第35页 |
| ·质粒的双酶切 | 第35页 |
| ·双酶切产物纯化 | 第35页 |
| ·目的片段和载体的连接、转化、鉴定 | 第35-36页 |
| ·去内毒素质粒的提取 | 第36页 |
| ·重组质粒pLV-423-5p的细胞水平鉴定 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-39页 |
| ·广西巴马小型猪基因组DNA提取结果 | 第36页 |
| ·PCR扩增结果 | 第36页 |
| ·PMD-19T-miR-423-5p重组质粒鉴定结果 | 第36-37页 |
| ·质粒双酶切鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·pLV-miR-423-5p重组质粒菌液PCR鉴定结果 | 第38页 |
| ·细胞水平鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| ·pLV-miR-423-5p慢病毒载体的构建 | 第40页 |
| ·细胞过表达验证 | 第40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第四章 miR-423-5p与SRF基因的靶标关系验证 | 第41-51页 |
| ·试验材料 | 第41页 |
| ·载体、细胞 | 第41页 |
| ·主要试剂、耗材 | 第41页 |
| ·试验方法 | 第41-46页 |
| ·广西巴马小型猪基因组DNA的提取 | 第41页 |
| ·正常靶标载体SRF-WT的构建 | 第41-43页 |
| ·突变靶标载体SRF-MUT的构建 | 第43页 |
| ·PK15细胞的培养 | 第43-44页 |
| ·共转染 | 第44-46页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测系统验证靶标基因 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-49页 |
| ·SRF-WT靶标载体构建结果 | 第46-48页 |
| ·突变靶标载体SRF-MUT的构建结果 | 第48页 |
| ·测序鉴定结果 | 第48-49页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测结果 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第五章 miR-423-5p在C2C12细胞中的功能验证 | 第51-60页 |
| ·试验材料 | 第51页 |
| ·细胞 | 第51页 |
| ·主要试剂、耗材 | 第51页 |
| ·试验方法 | 第51-52页 |
| ·引物设计与合成 | 第51-52页 |
| ·C2C12细胞的培养 | 第52页 |
| ·ELISA测定细胞SRF基因的蛋白浓度 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-57页 |
| ·C2C12细胞分化过程中细胞表型的变化及相关基因的表达规律检测 | 第52-55页 |
| ·C2C12细胞中过表达或抑制表达miR-423-5p后相关基因的表达分析 | 第55-57页 |
| ·ELISA实验检测细胞SRF蛋白浓度的结果 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| ·诱导C2C12细胞分化 | 第57-58页 |
| ·过表达或抑制miR-423-5p表达 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读硕士学位期间论文发表情况 | 第70页 |
