| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-28页 |
| ·丝状真菌纤维素酶系与产酶发酵 | 第13-16页 |
| ·丝状真菌纤维素酶系的组成 | 第13-14页 |
| ·嗜热真菌产纤维素酶系特点 | 第14-15页 |
| ·产纤维素酶培养基组成及产酶发酵条件 | 第15-16页 |
| ·丝状真菌糖代谢途径及相关酶 | 第16-22页 |
| ·糖酵解 | 第17-19页 |
| ·呼吸作用 | 第19-21页 |
| ·糖异生作用 | 第21页 |
| ·糖原的合成与分解 | 第21-22页 |
| ·实时荧光定量PCR分析基因表达效率 | 第22-23页 |
| ·利用强启动子构建表达载体 | 第23-26页 |
| ·丝状真菌诱导型表达系统的研究状况 | 第23-24页 |
| ·丝状真菌组成型表达系统的研究状况 | 第24-25页 |
| ·强启动子的筛选及表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·糖苷水解酶与GH61 家族蛋白 | 第26-28页 |
| ·糖苷水解酶的分类 | 第26-27页 |
| ·GH61 家族的作用及研究近况 | 第27-28页 |
| 第2章 耐热真菌T.terrestris产纤维素酶条件优化及产酶特性研究 | 第28-37页 |
| 引言 | 第28页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·试剂盒、酶及化学试剂 | 第28页 |
| ·培养基和溶液 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-30页 |
| ·种子活化及扩大培养 | 第29页 |
| ·产酶发酵培养及粗酶液提取 | 第29页 |
| ·滤纸酶活力(FPase)的测定 | 第29-30页 |
| ·碳氮源及培养条件对菌株产酶能力的影响 | 第30页 |
| ·优化条件正交设计 | 第30页 |
| ·粗酶液最适作用条件及温度稳定性的测定 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-35页 |
| ·T. terrestris产酶条件优化结果及滤纸酶活性质 | 第30-33页 |
| ·菌种活化结果 | 第30页 |
| ·碳氮源对产酶的影响 | 第30-31页 |
| ·产酶培养条件的优化 | 第31-33页 |
| ·发酵条件正交试验结果 | 第33-34页 |
| ·粗酶的最适作用条件及温度稳定性 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第3章 T. terrestris糖代谢基因表达效率分析及启动子筛选 | 第37-52页 |
| 引言 | 第37页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·菌株与质粒 | 第37页 |
| ·试剂盒、酶及化学试剂 | 第37页 |
| ·培养基和溶液 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37-38页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-46页 |
| ·T. terrestris糖代谢相关酶基因 | 第38-39页 |
| ·样品cDNA的制备 | 第39-41页 |
| ·菌体培养 | 第39-40页 |
| ·总RNA的提取 | 第40页 |
| ·总RNA的DNase处理及反转录 | 第40-41页 |
| ·荧光定量PCR | 第41-46页 |
| ·酶基因cDNA序列的获取及引物设计 | 第41-43页 |
| ·对131个糖代谢酶基因的初步筛选 | 第43-44页 |
| ·标准曲线和融解曲线的制作 | 第44-45页 |
| ·内参基因的筛选 | 第45-46页 |
| ·相对定量法检测不同基因mRNA的相对表达水平 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-51页 |
| ·凝胶电泳分析总RNA完整性 | 第46页 |
| ·初筛结果 | 第46-47页 |
| ·绘制标准曲线和融解曲线 | 第47页 |
| ·内参基因的选择 | 第47-48页 |
| ·18 个糖代谢酶基因荧光相对定量分析结果 | 第48-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| 第4章 利用高效启动子构建组成型表达系统 | 第52-69页 |
| 引言 | 第52页 |
| ·材料 | 第52-55页 |
| ·菌株与质粒 | 第52页 |
| ·试剂盒、酶及化学试剂 | 第52页 |
| ·培养基和溶液 | 第52-55页 |
| ·主要仪器设备 | 第55页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-60页 |
| ·构建表达盒 | 第55-58页 |
| ·T. terrestris基因组DNA的提取 | 第55-56页 |
| ·gpd启动子和终止子的克隆及获取xyn序列 | 第56-57页 |
| ·Pgpd-xyn-Tgpd表达盒的建立 | 第57-58页 |
| ·表达盒Pgpd-xyn-Tgpd与pAN7-1 共转化原生质体 | 第58-60页 |
| ·共转化T.terrestris原生质体 | 第58-59页 |
| ·转化子的鉴定 | 第59页 |
| ·木聚糖酶活的测定 | 第59-60页 |
| ·结果 | 第60-66页 |
| ·gpd基因启动子的克隆和表达载体的构建 | 第60-62页 |
| ·PCR扩增gpd基因启动子和终止子序列及xyn基因 | 第60-61页 |
| ·Pgpd-xyn-Tgpd表达盒的连接及序列验证 | 第61-62页 |
| ·T. terrestris原生质体制备与共转化 | 第62-66页 |
| ·转化子双引物PCR验证 | 第64-65页 |
| ·转化株的木聚糖酶活力 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 附录 A 荧光定量 PCR 相关曲线 | 第77-95页 |
| 附录 B Pgpd-xyn-Tgpd 表达盒的测序序列比对 | 第95-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第99-100页 |
